四尾柵藻具有環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)和生長(zhǎng)速度快等優(yōu)點(diǎn)，如果能將其進(jìn)行品種改良，提高含油量，有望解決微藻生物柴油產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程的瓶頸。研究人員利用基因工程技術(shù)將油料作物紫蘇DGAT1基因?qū)胨奈矕旁澹@得轉(zhuǎn)基因的產(chǎn)油微藻，利用地?zé)釓U水培養(yǎng)，不僅能生產(chǎn)生物柴油，還能治理地?zé)釓U水。操作過(guò)程如圖，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
注：LacZ基因編碼產(chǎn)生的酶可以分解物質(zhì)X-gal,從而使菌落顯現(xiàn)出藍(lán)色。若無(wú)該基因或該基因被破壞，則菌落呈白色。
（1）將質(zhì)粒pMD19-DGAT1導(dǎo)入大腸桿菌前，通常先用Ca2+處理大腸桿菌，使細(xì)胞處于一種
能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子
能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子
的生理狀態(tài)。
（2）為了便于篩選含pMD19-DGAT1重組質(zhì)粒的大腸桿菌，該選擇培養(yǎng)基中應(yīng)添加 卡那霉素和X-gal
卡那霉素和X-gal
物質(zhì)。在培養(yǎng)基中挑取 白色
白色
顏色的大腸桿菌菌落可提取該 質(zhì)粒并獲取目的基因。
（3）由如圖推測(cè)，用 EcoRⅠ
EcoRⅠ
和 SmaⅠ
SmaⅠ
酶切割pMD19-DGAT1獲得DGATI基因，并與酶切后的載體pBI121連接再次構(gòu)建基因表達(dá)載體，用這兩種酶切割的目的是 保證其準(zhǔn)確插入質(zhì)粒（定向連接）并防止其出現(xiàn)自身環(huán)化等問(wèn)題（或防止反向連接和自身環(huán)化）
保證其準(zhǔn)確插入質(zhì)粒（定向連接）并防止其出現(xiàn)自身環(huán)化等問(wèn)題（或防止反向連接和自身環(huán)化）
。
（4）啟動(dòng)子往往具有物種特異性，在載體pBI121質(zhì)粒中插入紫蘇DGAT1基因，其上游啟動(dòng)子應(yīng)選擇 B
B
（填字母）。
A．紫蘇DGAT1基因啟動(dòng)子 B．四尾柵藻啟動(dòng)子 C．大腸桿菌啟動(dòng)子
（5）為了判斷DGAT1基因是否導(dǎo)入四尾柵藻細(xì)胞，可利用 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
（中文全稱(chēng)）等技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。
（6）為檢測(cè)轉(zhuǎn)基因四尾柵藻對(duì)地?zé)釓U水的去污能力，研究人員設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)并得到相應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表。
| 指標(biāo) |
總氮（mg/L） |
總磷（mg/L） |
氟化物（mg/L） |
| 廢水培養(yǎng)基 |
23.2 |
4.32 |
4.56 |
| 培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因四尾柵藻11天后 |
1.9 |
0.45 |
0.84 |
該實(shí)驗(yàn)不能說(shuō)明轉(zhuǎn)DGAT1基因顯著提高了四尾柵藻的去污能力。請(qǐng)進(jìn)一步完善實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
應(yīng)添加對(duì)照組：廢水培養(yǎng)非轉(zhuǎn)基因四尾柵藻 11 天后，檢測(cè)總氮、總磷和氟化物的含量
應(yīng)添加對(duì)照組：廢水培養(yǎng)非轉(zhuǎn)基因四尾柵藻 11 天后，檢測(cè)總氮、總磷和氟化物的含量
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