新冠疫情后,病毒核酸檢測和疫苗接種在疫情防控中發(fā)揮了重要作用,回答下列問題。
(1)新冠病毒是一種RNA病毒,檢測新冠病毒RNA(核酸檢測)可以采取RT-PCR法,該過程中需要用到的酶有
逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶
逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶
。
(2)為了確保新冠病毒核酸檢測的準(zhǔn)確性,在設(shè)計PCR引物時必須依據(jù)新冠病毒RNA中的來進(jìn)行。據(jù)圖1分析,選擇的引物是 Ⅱ、Ⅲ
Ⅱ、Ⅲ
。其作用是 使TaqDNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸
使TaqDNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸
。
(3)下表是SARS-CoV-2核酸檢測時PCR儀參數(shù)設(shè)定要求;
步驟 |
a、病毒cDNA合成 |
b、預(yù)變性 |
c、變性 |
d、? |
溫度 |
50℃ |
95℃ |
95℃ |
60℃ |
時間 |
15min |
5min |
5s |
40s |
循環(huán) |
1 |
1 |
45 |
①步驟a的反應(yīng)時間要足夠長,其目的是
保證樣本中病毒RNA均能逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA
保證樣本中病毒RNA均能逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA
。
②步驟d的主要包括PCR過程的
復(fù)性、延伸
復(fù)性、延伸
階段。
(4)PCR的產(chǎn)物一般通過電泳來鑒定,結(jié)果如圖2所示。1號泳道為標(biāo)準(zhǔn)(Marker),2號泳道為陽性對照(提純的目的基因片段),3號泳道為實驗組。標(biāo)準(zhǔn)(Marker)的實質(zhì)為不同已知長度的DNA片段混合物:3號泳道的若出現(xiàn)雜帶,原因一般有
模板受到污染;引物的特異性不強(qiáng);復(fù)性溫度偏低;Mg2+濃度過高等
模板受到污染;引物的特異性不強(qiáng);復(fù)性溫度偏低;Mg2+濃度過高等
(至少答出兩點(diǎn))。
(5)某人同時進(jìn)行了新冠病毒核酸檢測和抗體檢測(檢測體內(nèi)是否有新冠病毒抗體),若核酸檢測結(jié)果為陰性而抗體檢測結(jié)果為陽性,說明
曾經(jīng)感染過新冠病毒但已康復(fù)
曾經(jīng)感染過新冠病毒但已康復(fù)
(答出1種情況即可);若核酸檢測結(jié)果為陽性而抗體檢測為陰性,說明
己感染新冠病毒,還未康復(fù)
己感染新冠病毒,還未康復(fù)
。