報(bào)告基因是指一類易于檢測(cè)且實(shí)驗(yàn)材料本身不具備的基因。阿爾茨海默?。ˋD）是由淀粉樣前體蛋白（APP）過量表達(dá)導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病，用增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）基因作為報(bào)告基因，將EGFP基因與 APP 基因融合，可方便、經(jīng)濟(jì)、快速地篩選出促進(jìn)人 APP mRNA降解的藥物。研究表明，EGFP與APP 基因融合后，雖能全部轉(zhuǎn)錄但僅有 ECFP蛋白得到表達(dá)。EGFP基因與 APP 基因融合過程如圖所示。

（1）APP751、EGFP基因的cDNA 是以其mRNA 為模板經(jīng)

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

過程形成的，將其儲(chǔ)存于細(xì)菌質(zhì)粒中，屬于構(gòu)建

基因文庫（部分基因文庫或cDNA文庫）

基因文庫（部分基因文庫或cDNA文庫）

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（2）據(jù)圖分析，Klenow 酶的作用是

將XhaⅠ切割獲得的黏性末端催化產(chǎn)生平末端

將XhaⅠ切割獲得的黏性末端催化產(chǎn)生平末端

。切割 peDNA3.1質(zhì)粒獲得APP751基因時(shí)，研究人員沒有選擇直接用HindⅢ、XbaⅠ同時(shí)切割，而是歷經(jīng)①→②→③的復(fù)雜過程，原因是

直接用HindⅢ、XhaⅠ同時(shí)切割、產(chǎn)物兩端都是黏性末端、而經(jīng)過①→②→③可使目的基因兩端分別為平末端和黏性末端，才能與被SmaⅠ與HindⅢ打開的載體連接

直接用HindⅢ、XhaⅠ同時(shí)切割、產(chǎn)物兩端都是黏性末端、而經(jīng)過①→②→③可使目的基因兩端分別為平末端和黏性末端，才能與被SmaⅠ與HindⅢ打開的載體連接

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（3）COS-7是來源于非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞，培養(yǎng)這類細(xì)胞時(shí)，為保證細(xì)胞生長(zhǎng)和避免污染，應(yīng)分別在合成培養(yǎng)基中添加

血漿、血清和抗生素

血漿、血清和抗生素

，傳代培養(yǎng)不宜超過 10 代，原因是

細(xì)胞在傳至10代后，增減減緩乃至停止，部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化

細(xì)胞在傳至10代后，增減減緩乃至停止，部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化

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