乙酰膽堿酯酶（AChE）是催化乙酰膽堿分解的水解酶，還能與有機(jī)磷農(nóng)藥發(fā)生特異反應(yīng)，在水質(zhì)檢測(cè)中可用于有機(jī)磷農(nóng)藥污染的快速檢測(cè)，乙酰膽堿酯酶對(duì)防治人類疾病、保護(hù)生態(tài)環(huán)境等方面的研究具有非常重要的意義?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）AChE的提取與純化：AChE廣泛存在于各種動(dòng)物組織中，欲從動(dòng)物肝臟中提取AChE，獲取新鮮肝臟后，必須立即處理或低溫保存，因?yàn)?乙酰膽堿酯酶很有可能失去活性乙酰膽堿酯酶很有可能失去活性。將豬肝切碎后，加低溫蒸餾水，為了防止血液過(guò)快的凝結(jié)，可適量加入 血液抗凝劑血液抗凝劑，在組織搗碎機(jī)中搗碎后離心，取 上清液上清液用于進(jìn)一步分離和純化。
（2）AChE的基因克隆技術(shù)：利用PCR技術(shù)或RT-PCR技術(shù)（即利用逆轉(zhuǎn)錄和PCR技術(shù)）克隆AChE基因時(shí)，反應(yīng)體系中均需要加入 耐高溫的TaqDNA聚合耐高溫的TaqDNA聚合酶，加入dNTP用于提供 原料和能量原料和能量。PCR產(chǎn)物經(jīng) 凝膠電泳凝膠電泳技術(shù)純化后，可用 限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶處理回收的DNA和克隆載體，獲得重組DNA分子，最終達(dá)到體內(nèi)克隆AChE基因的目的。
（3）AChE的基因表達(dá)：若構(gòu)建大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，最好選擇 RT-PCRRT-PCR技術(shù)（填“PCR”或“RT-PCR”）獲取AChE基因．與克隆AChE基因相比，表達(dá)載體中還需要加入大腸桿菌的 啟動(dòng)子和終止子啟動(dòng)子和終止子等。在培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，常使用 LB液體LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，用 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法接種到平板上，更易獲得相應(yīng)菌株。
（4）研究人員在進(jìn)行某地水質(zhì)檢測(cè)時(shí)，發(fā)現(xiàn)水樣能與AChE發(fā)生特異反應(yīng)，若不及時(shí)治理，可能會(huì)造成水體 富營(yíng)養(yǎng)化富營(yíng)養(yǎng)化。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】乙酰膽堿酯酶很有可能失去活性；血液抗凝劑；上清液；耐高溫的TaqDNA聚合；原料和能量；凝膠電泳；限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接；RT-PCR；啟動(dòng)子和終止子；LB液體；稀釋涂布平板；富營(yíng)養(yǎng)化
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：8引用：2難度：0.5
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1．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1，SLA-2基因長(zhǎng)度為1100bp,質(zhì)粒B的總長(zhǎng)度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)回答：
（1）過(guò)程①中，PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過(guò)程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過(guò)程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請(qǐng)?jiān)诖痤}紙相應(yīng)位置畫(huà)出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對(duì)真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個(gè)濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒(méi)有抗性的細(xì)胞死亡又不會(huì)讓。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過(guò)程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測(cè)腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測(cè)其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
2．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說(shuō)法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實(shí)驗(yàn)，說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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