乙酰膽堿酯酶（AChE）是催化乙酰膽堿分解的水解酶，還能與有機(jī)磷農(nóng)藥發(fā)生特異反應(yīng)，在水質(zhì)檢測(cè)中可用于有機(jī)磷農(nóng)藥污染的快速檢測(cè)，乙酰膽堿酯酶對(duì)防治人類(lèi)疾病、保護(hù)生態(tài)環(huán)境等方面的研究具有非常重要的意義?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）AChE的提取與純化：AChE廣泛存在于各種動(dòng)物組織中，欲從動(dòng)物肝臟中提取AChE，獲取新鮮肝臟后，必須立即處理或低溫保存，因?yàn)?

乙酰膽堿酯酶很有可能失去活性

乙酰膽堿酯酶很有可能失去活性

。將豬肝切碎后，加低溫蒸餾水，為了防止血液過(guò)快的凝結(jié)，可適量加入

血液抗凝劑

血液抗凝劑

，在組織搗碎機(jī)中搗碎后離心，取

上清液

上清液

用于進(jìn)一步分離和純化。
（2）AChE的基因克隆技術(shù)：利用PCR技術(shù)或RT-PCR技術(shù)（即利用逆轉(zhuǎn)錄和PCR技術(shù)）克隆AChE基因時(shí)，反應(yīng)體系中均需要加入

耐高溫的TaqDNA聚合

耐高溫的TaqDNA聚合

酶，加入dNTP用于提供

原料和能量

原料和能量

。PCR產(chǎn)物經(jīng)

凝膠電泳

凝膠電泳

技術(shù)純化后，可用

限制性?xún)?nèi)切核酸酶和DNA連接

限制性?xún)?nèi)切核酸酶和DNA連接

酶處理回收的DNA和克隆載體，獲得重組DNA分子，最終達(dá)到體內(nèi)克隆AChE基因的目的。
（3）AChE的基因表達(dá)：若構(gòu)建大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，最好選擇

RT-PCR

RT-PCR

技術(shù)（填“PCR”或“RT-PCR”）獲取AChE基因．與克隆AChE基因相比，表達(dá)載體中還需要加入大腸桿菌的

啟動(dòng)子和終止子

啟動(dòng)子和終止子

等。在培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，常使用

LB液體

LB液體

培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，用

稀釋涂布平板

稀釋涂布平板

法接種到平板上，更易獲得相應(yīng)菌株。
（4）研究人員在進(jìn)行某地水質(zhì)檢測(cè)時(shí)，發(fā)現(xiàn)水樣能與AChE發(fā)生特異反應(yīng)，若不及時(shí)治理，可能會(huì)造成水體

富營(yíng)養(yǎng)化

富營(yíng)養(yǎng)化

。