人類猴痘由Yaba猴病毒（雙鏈DNA病毒）引起，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）可用于Yaba猴病毒的快速檢測(cè)。進(jìn)行aPCR時(shí)，在反應(yīng)體系加入Taqman探針，Taqman探針兩端連有熒光基團(tuán)（R）和抑制熒光發(fā)出的淬滅基團(tuán)（Q），完整的Taqman探針不發(fā)出熒光，當(dāng)探針被水解后R基團(tuán)會(huì)發(fā)出熒光（如圖1所示），隨循環(huán)次數(shù)的增加，熒光信號(hào)強(qiáng)度增加。

（1）采用qPCR檢測(cè)Yaba猴病毒需在一定的

緩沖

緩沖

溶液中才能進(jìn)行，反應(yīng)體系中還需提供DNA模板、原料、

引物

引物

、Taqman探針、TaqDNA聚合酶、Mg²⁺等。aPCR過程中，TagDNA聚合酶的兩個(gè)作用是

催化合成DNA 子鏈；催化探針?biāo)?/div>

催化合成DNA 子鏈；催化探針?biāo)?/div>。
（2）qPCR檢測(cè)病毒的核酸一般具有特異性強(qiáng)和靈敏度高的特點(diǎn)，這與反應(yīng)體系中加入的

引物

引物

和

探針

探針

有關(guān)。但有時(shí)也可能會(huì)出現(xiàn)“假陰性”的結(jié)果。可能的原因有

取樣不規(guī)范；取樣所獲樣本量不足；病毒發(fā)生了基因突變

取樣不規(guī)范；取樣所獲樣本量不足；病毒發(fā)生了基因突變

（答出兩點(diǎn)）。
（3）在PCR反應(yīng)體系中一般都要加入Mg²⁺，原因是

TaqDNA 聚合酶需要Mg²⁺激活

TaqDNA 聚合酶需要Mg²⁺激活

。為了探究業(yè)Mg²⁺對(duì)PCR擴(kuò)增效果的影響，科研人員在PCR反應(yīng)體系中加入不同濃度的Mg²⁺進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如圖2所示，據(jù)此可得出的結(jié)論有

在不含 Mg²⁺的緩沖液中靶基因幾乎無法擴(kuò)增；在不同濃度的Mg²⁺緩沖液中靶基因的擴(kuò)增效果不同；在實(shí)驗(yàn)濃度下，4mM 為最佳濃度

在不含 Mg²⁺的緩沖液中靶基因幾乎無法擴(kuò)增；在不同濃度的Mg²⁺緩沖液中靶基因的擴(kuò)增效果不同；在實(shí)驗(yàn)濃度下，4mM 為最佳濃度

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