人血清白蛋白（HSA）是血漿蛋白的主要成分，具有維持血漿滲透壓和進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸?shù)墓δ?。利用基因工程生產(chǎn)重組人血清白蛋白（rHSA）可解決HSA短缺問題。科研人員依據(jù)基因組中HSA基因的堿基序列，同時考慮生產(chǎn)菌X（一種組氨酸缺陷型酵母菌）的生理特點(diǎn)，人工設(shè)計了rHSA基因。圖1表示HSA基因，圖2為基因工程所用質(zhì)粒及相關(guān)元件（基因S控制合成信號肽，能引導(dǎo)后續(xù)合成的肽鏈進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔；HIS4控制合成組氨酸）。請回答下列問題：

（1）若要擴(kuò)增出HSA基因并用于表達(dá)載體的構(gòu)建，應(yīng)選擇的引物是

引物Ⅱ和引物Ⅰ

引物Ⅱ和引物Ⅰ

，其作用是

使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸

。
（2）將rHSA基因構(gòu)建在S基因后形成融合基因，目的是

可以讓rHSA具有信號肽，有利于其進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中進(jìn)行加工

可以讓rHSA具有信號肽，有利于其進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中進(jìn)行加工

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（3）rHSA基因?qū)肷a(chǎn)菌X需要經(jīng)過兩次篩選：第一次在含有

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的培養(yǎng)基中篩選得到含rHSA基因表達(dá)載體的大腸桿菌；第二次篩選時，將上述大腸桿菌與生產(chǎn)菌X混合，然后在

不含組氨酸

不含組氨酸

的基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)，可在此培養(yǎng)基上生長的生產(chǎn)菌X含有rHSA基因表達(dá)載體。HSA基因表達(dá)載體既可在大腸桿菌中又可在生產(chǎn)菌X中穩(wěn)定遺傳的原因是

該基因表達(dá)載體上既有原核生物復(fù)制原點(diǎn)，又有真核生物復(fù)制原點(diǎn)

該基因表達(dá)載體上既有原核生物復(fù)制原點(diǎn)，又有真核生物復(fù)制原點(diǎn)

。
（4）AOX1為甲醇氧化酶的啟動子，以其作為rHSA基因的啟動子時，在以甲醇為碳源的培養(yǎng)基中rHSA基因正常表達(dá)，無甲醇時該基因不表達(dá)。從生產(chǎn)控制的角度分析，選用AOX1作為rHSA基因的啟動子的優(yōu)點(diǎn)是

可以通過控制培養(yǎng)液中甲醇的有無來控制rHSA基因的表達(dá)

可以通過控制培養(yǎng)液中甲醇的有無來控制rHSA基因的表達(dá)

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