草甘膦是一種非選擇性除草劑,殺死雜草的同時也殺死農(nóng)作物。它與植物體內(nèi)的PEP(磷酸烯醇式丙酮酸)結(jié)構(gòu)相似,可與PEP競爭結(jié)合EPSP合酶,阻止PEP轉(zhuǎn)化,影響植物細胞正常代謝而導(dǎo)致植物死亡。我國科學(xué)家從草甘膦施用土壤中的微生物體內(nèi)獲取草甘膦抗性基因GR29,并將其導(dǎo)入大豆體細胞中獲得轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆,如圖所示?;卮鹣铝袉栴}:
(1)圖中的GR29基因稱為 目的基因目的基因,通過PCR技術(shù)可在總DNA中專一性的擴增出GR29基因,原因是 PCR過程中使用的引物能與GR29基因的cDNA特異性結(jié)合PCR過程中使用的引物能與GR29基因的cDNA特異性結(jié)合。
(2)圖中將GR29基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上,原因是農(nóng)桿菌能將Ti質(zhì)粒上的T-DNA分子轉(zhuǎn)移到宿主細胞并整合到宿主細胞的 染色體DNA染色體DNA上。構(gòu)建的重組Ti質(zhì)粒中除圖示元件外,還必須具有啟動子和終止子,其中啟動子的作用是 啟動子是RNA聚合酶識別與結(jié)合的部位,它能驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA啟動子是RNA聚合酶識別與結(jié)合的部位,它能驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。
(3)圖中的兩次篩選中,其中“篩選1”中,需在農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基中添加 四環(huán)素四環(huán)素,才能篩選出含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌。在“篩選2”中,為檢測GR29基因能否翻譯出相應(yīng)蛋白可采用的方法是 抗原—抗體雜交技術(shù)抗原—抗體雜交技術(shù)。
(4)為獲得草甘膦抗性更強的轉(zhuǎn)基因大豆,請嘗試對上述轉(zhuǎn)基因大豆培育過程進行改進,寫出你的改進措施:用添加草甘膦的培養(yǎng)基進行篩選,并可逐步增加濃度用添加草甘膦的培養(yǎng)基進行篩選,并可逐步增加濃度。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】目的基因;PCR過程中使用的引物能與GR29基因的cDNA特異性結(jié)合;染色體DNA;啟動子是RNA聚合酶識別與結(jié)合的部位,它能驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA;四環(huán)素;抗原—抗體雜交技術(shù);用添加草甘膦的培養(yǎng)基進行篩選,并可逐步增加濃度
【解答】
【點評】
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