IKK激酶參與動物體內免疫細胞的分化。臨床上發(fā)現某重癥聯合免疫缺陷（SCID）患兒IKKB基內編碼區(qū)第1183位硫堿基T突變?yōu)镃，導致IKK激酶上第395位酪氨酸被組氨酸代替。為研究該患兒發(fā)病機制，研究人員利用純合野生鼠，應用大引物PCR定點誘變技術培育出SCID模型小鼠（純合），主要過程如圖1、2所示。分析回答下列問題：
（1）在 PCR反應體系中，除需加入引物、IKKB基因、緩沖液、Mg2+等外，還需加入 Taq酶（耐高溫DNA聚合酶/熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、4種脫氧核苷酸（或dNTP）Taq酶（耐高溫DNA聚合酶/熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、4種脫氧核苷酸（或dNTP）等成分。
（2）在圖1獲取突變基因過程中，需要以下3種引物：
| 引物A | 5′-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3′（下劃線字母為突變堿基） |
| 引物B | 5′-TAAGCTTCGAACATCCTA-3′（下劃線部分分為限制酶HindⅢ識別序列） |
| 引物C | 5′-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3′（下劃線部分分為限制酶SacⅠ識別序列） |
引物A和引物C
引物A和引物C
，PCR2中使用的引物有 引物B
引物B
和圖中大引物的 ②
②
（填“①”或“②”）鏈。（3）PCR一般要經歷三十多次循環(huán)，每個循環(huán)包括變性、復性、延伸三個環(huán)節(jié)，在第一個循環(huán)之前通常
在95℃左右條件下處理數分鐘，稱為預變性，預變性的目的是
增加大分子模板DNA徹底變性的概率
增加大分子模板DNA徹底變性的概率
。（4）研究人員經鑒定、篩選獲得一只轉基因雜合鼠F0，并確認突變基因已經穩(wěn)定同源替代IKKB基因。利用雜合鼠F0，通過雜交獲得SCID模型鼠，請將實驗思路補充完整：
選F0與野生鼠雜交，得F1；讓F1雌雄鼠隨機交配得F2
選F0與野生鼠雜交，得F1；讓F1雌雄鼠隨機交配得F2
；提取F2中每只小鼠的基因組DNA，通過基因測序選出SCID模型鼠。【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】Taq酶（耐高溫DNA聚合酶/熱穩(wěn)定DNA聚合酶）、4種脫氧核苷酸（或dNTP）；引物A和引物C；引物B；②；增加大分子模板DNA徹底變性的概率；選F0與野生鼠雜交，得F1；讓F1雌雄鼠隨機交配得F2
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：12引用：1難度：0.7
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1．以下是有關分離與鑒別DNA的技術，其中說法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5難度：0.5 -
2．科研人員克隆了豬白細胞抗原基因（SLA-2基因），構建了該基因的真核表達載體，進行了豬腎上皮細胞表達研究。實驗的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數字表示距復制原點的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質粒導入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質粒C后電泳，請在答題紙相應位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細胞進行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細胞死亡又不會讓。實驗結果如圖2，根據實驗結果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細胞生產的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
3．下列關于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”的實驗，說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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