研究發(fā)現(xiàn)，人溶菌酶（hLZ）是天然抗生素替代品。科研人員培育出轉(zhuǎn)入hLZ基因羊以大規(guī)模生產(chǎn)人溶菌酶（從乳汁中提?。^程如圖1所示，其中編號①～⑨表示過程；質(zhì)粒S中的標(biāo)記基因Leu控制合成亮氨酸，標(biāo)記基因GFP控制合成綠色熒光蛋白；四種限制酶的識別序列及切割位點分別是BamHI：G↓GATCC、BglI：A↓GATCT、HindI：A↓AGCTT、XbaI：T↓CTAGA。請分析并回答下列問題：

（1）過程①采用PCR技術(shù)對hLZ基因進(jìn)行擴增，若一個該DNA分子在PCR儀中經(jīng)過4次循環(huán)，產(chǎn)物中共有

8

8

個等長的hLZ基因片段。
（2）過程②物質(zhì)B的獲得是用限制酶

BamHⅠ、HindⅢ

BamHⅠ、HindⅢ

切割的結(jié)果，重組質(zhì)粒T上hLZ基因前需添加

乳腺中特異性表達(dá)的基因的啟動子

乳腺中特異性表達(dá)的基因的啟動子

，以確保能夠在轉(zhuǎn)基因羊的乳汁中獲得hLZ。
（3）為成功篩選出含重組質(zhì)粒T的成纖維細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)液中

不需要

不需要

（填：“需要”或“不需要”）添加亮氨酸。過程⑧通常是用物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，使其完成

細(xì)胞的分裂和分化

細(xì)胞的分裂和分化

，再進(jìn)行過程⑨獲得轉(zhuǎn)基因羊。
（4）基因編輯技術(shù)，能較為精確的對生物體基因組中特定目的基因進(jìn)行改造。基因編輯體系包括核酸內(nèi)切酶與一段小RNA（crRNA），crRNA通過堿基互補配對準(zhǔn)確識別靶基因上特定序列后，引導(dǎo)核酸內(nèi)切酶定位到靶基因上進(jìn)行切割，隨后細(xì)胞啟動DNA損傷修復(fù)機制，可引發(fā)DNA小片段缺失或插入，進(jìn)而實現(xiàn)基因編輯?？蒲腥藛T利用上述方法使轉(zhuǎn)基因羊干細(xì)胞中的R基因功能喪失（基因敲除），導(dǎo)致Tsp45I酶（一種限制酶）識別序列發(fā)生突變。提取進(jìn)行基因編輯后的細(xì)胞（A1～A11）中的DNA，利用PCR技術(shù)擴增R基因的相關(guān)區(qū)域，再用Tsp45Ⅰ酶切處理后，電泳結(jié)果如圖2所示（bp表示堿基對）。A5、A7、A11的電泳結(jié)果說明

R基因被完全敲除

R基因被完全敲除

，這些干細(xì)胞的R基因具體改變情況為

缺失21個堿基對

缺失21個堿基對

，一條染色體上的R基因未成功敲除細(xì)胞有

A6、A8、A9

A6、A8、A9

。