圖1表示CRISPR/Cas9基因編輯的主要作用機理，通過對靶基因的剪切和DNA自我修復可實現(xiàn)靶基因的定點突變。圖2是FANCM基因結(jié)構示意圖，F(xiàn)ANCM蛋白能阻止減數(shù)分裂過程中交叉互換的發(fā)生?？蒲腥藛T通過構建CRISPR/Cas9重組表達載體，以生菜嫩葉作外植體，經(jīng)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化，培育出FANCM基因的突變純合新品種。請回答下列問題：

（1）組成FANCM基因外顯子和內(nèi)含子的基本組成單位是

脫氧核苷酸

脫氧核苷酸

。根據(jù)圖2靶序列設計的gRNA中相應序列是5′-

UUGUAUACCAUGAGCUGAAAGG-

UUGUAUACCAUGAGCUGAAAGG-

-3′。
（2）構建 CRISPR/Cas9重組表達載體時主要利用的工具酶有

DNA連接酶和限制酶

DNA連接酶和限制酶

。研究中需要將gRNA和Cas9基因序列均插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA內(nèi)部，其目的是

T-DNA可以插入到受體細胞

T-DNA可以插入到受體細胞

。
（3）科研人員將 CRISPR/Cas9重組表達載體導入農(nóng)桿菌時，為提高導入成功率，常利用CaCl₂處理農(nóng)桿菌，其目的是

使農(nóng)桿菌成為感受態(tài)，易于接受環(huán)境中的DNA分子

使農(nóng)桿菌成為感受態(tài)，易于接受環(huán)境中的DNA分子

。將轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌接種到液體培養(yǎng)基中，在220r?min^-1、28℃條件下?lián)u床培養(yǎng)10～12h,其目的是

使農(nóng)桿菌恢復常態(tài)，易于大量培養(yǎng)增殖

使農(nóng)桿菌恢復常態(tài)，易于大量培養(yǎng)增殖

。
（4）科研人員通過對生菜細胞中FANCM基因測序確定突變株，如表是野生型生菜和實驗獲得的生菜植株（T₀）的相關測序結(jié)果。

野生型生菜	5′-AAAGCTCCTTTCAGCTCATGGTATACAACCAGCATTTGAT-3′
T0植株	5′-AAAGCTCCTTTCAGCTCATGGTATACAACCAGCATTTGAT-3′
	5′-AAAGCTCCTTTCATCATGGTATACAACCAGCATTTGAT-3′

①T₀植株發(fā)生的基因突變類型是

缺失

缺失

。若T.植株連續(xù)自交兩代，則F₂中突變純合體占比為

3

8

3

8

。
②獲得的FANCM基因突變純合體在遺傳育種中的應用價值是

增加雜交育種過程中基因重組的頻率，產(chǎn)生更多新品種，加速生菜育種進程

增加雜交育種過程中基因重組的頻率，產(chǎn)生更多新品種，加速生菜育種進程

。