豬血紅蛋白位于豬紅細胞內(nèi),含有4條肽鏈。以下是分離及提取豬血紅蛋白的過程,回答下列問題:
(1)在新鮮的豬血中加入按125:1配成的0.85%NaCl溶液(生理鹽水)和40%檸檬酸鈉,混合液,此混合液的作用是維持紅細胞的形態(tài),防止血液凝固維持紅細胞的形態(tài),防止血液凝固。然后離心,棄去血清。再用生理鹽水洗滌三次,用以除去雜蛋白。
(2)向盛有洗滌好的豬紅細胞的燒杯中加入蒸餾水可釋放血紅蛋白,原理是紅細胞在蒸餾水中吸水漲破,釋放血紅蛋白紅細胞在蒸餾水中吸水漲破,釋放血紅蛋白。加入飽和(NH4)2SO4溶液后,發(fā)現(xiàn)有紅色沉淀析出,這個過程稱為鹽析鹽析。經(jīng)過濾可得到豬血紅蛋白的粗蛋白。
(3)將豬血紅蛋白的粗蛋白溶解在磷酸緩沖液中,用凝膠色譜柱層析純化。磷酸緩沖液的作用是有利于維持蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能有利于維持蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能凝膠色譜法分離豬血紅蛋白的原理是分子量較大蛋白質(zhì)通過凝膠顆粒的間隙,路程較短,移動速度較快,先洗脫出來;分子量較小的蛋白質(zhì)容易進入凝膠內(nèi)部通道,路程較長,移動速度較慢,后洗脫出來分子量較小的蛋白質(zhì)容易進入凝膠內(nèi)部通道,路程較長,移動速度較慢,后洗脫出來。
(4 )將凝膠色譜柱層析純化得到的豬血紅蛋白用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行分離。SDS有強電荷,能覆蓋蛋白質(zhì)上的電荷,并使豬血紅蛋白解聚為4條肽鏈。因此,電泳時蛋白質(zhì)的遷移率完全取于分子分子量分子量。如圖是電泳結(jié)果,結(jié)果表明分離得到的豬血紅蛋白純度較高,判斷依據(jù)是電泳后只有一個條帶電泳后只有一個條帶,豬血紅蛋白的分子量約為64KDa64KDa。
【答案】維持紅細胞的形態(tài),防止血液凝固;紅細胞在蒸餾水中吸水漲破,釋放血紅蛋白;鹽析;有利于維持蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能;分子量較小的蛋白質(zhì)容易進入凝膠內(nèi)部通道,路程較長,移動速度較慢,后洗脫出來;分子量;電泳后只有一個條帶;64KDa
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:38引用:1難度:0.7
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