我國(guó)在國(guó)際上首次明確了病毒mRNA“加帽”后形成成熟mRNA的關(guān)鍵酶分子，并且該分子在各突變株中高度保守，在人體中沒(méi)有同源物，為發(fā)展新型、安全的廣譜抗病毒藥物提供了全新靶點(diǎn)，為優(yōu)化針對(duì)“加帽”分子的抗病毒藥物提供了關(guān)鍵科學(xué)依據(jù)。
（1）SARS-CoV-2在呼吸道黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)合成的mRNA“加帽”成熟需要的關(guān)鍵酶分子是
RNA聚合酶
RNA聚合酶
，如果以該酶分子為靶點(diǎn)找到了相應(yīng)的抗體，區(qū)別于一般藥物治療更具優(yōu)越性，理由是 關(guān)鍵酶分子高度保守，在人體中沒(méi)有同源物
關(guān)鍵酶分子高度保守，在人體中沒(méi)有同源物
。
（2）加端PCR是使擴(kuò)增產(chǎn)物的末端加上一段DNA順序的PCR，加端PCR的引物被設(shè)計(jì)成除與模板配對(duì)的那一部分以外再加上若干堿基，以便能使擴(kuò)增產(chǎn)物的末端加上額外的一段DNA。科研人員首先獲取了“加帽”關(guān)鍵酶分子抗體的mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA（互補(bǔ)的DNA鏈）。
①采用PCR技術(shù)對(duì)cDNA擴(kuò)增了n代，則第n代共需要引物 2n-1
2n-1
個(gè)。
②構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，為了使目的基因的兩端與質(zhì)粒相應(yīng)位置具有相同的限制酶切割位點(diǎn)，據(jù)表格和圖分析，在PCR擴(kuò)增“加帽”關(guān)鍵酶分子抗體基因時(shí)設(shè)計(jì)的引物末端需要加上的最佳額外DNA序列是 5'GGATCC
5'GGATCC
和 5'AAGCTT
5'AAGCTT
。
| 酶 |
BamHⅠ |
SacⅠ |
HindⅢ |
XbaⅠ |
| 識(shí)別序列 |
5′GGATCC |
5′GAGCTC |
5′AAGCTT |
5′TCTAGA |
（3）2022年3月15日，第九版新冠診療方案發(fā)布了國(guó)家藥監(jiān)局批準(zhǔn)的、我國(guó)自主研制的特異性抗新冠病毒藥物一PF-07321332/利托那韋片單克隆抗體。單克隆抗體制備過(guò)程中取免疫陽(yáng)性小鼠的
B淋巴細(xì)胞
B淋巴細(xì)胞
細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合培養(yǎng)，融合后最終篩選出具有
既能無(wú)限增殖又能分泌特異性抗體
既能無(wú)限增殖又能分泌特異性抗體
特點(diǎn)的細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)或體外培養(yǎng)制備抗體。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是
特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備
特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備
。
