胰蛋白酶抑制劑（TI）可抑制昆蟲蛋白酶活性，阻礙昆蟲消化蛋白質(zhì)。鹽藻是一種無細(xì)胞壁的單細(xì)胞真核綠藻，是能在高鹽條件下生長的新型生物反應(yīng)器。研究人員利用基因工程技術(shù)構(gòu)建TI基因的表達(dá)載體，并將其導(dǎo)入鹽藻細(xì)胞中，進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)?；卮鹣铝袉栴}：
（1）研究人員利用PCR技術(shù)特異性地?cái)U(kuò)增目的基因的前提是需要

一段已知目的基因的核苷酸序列

一段已知目的基因的核苷酸序列

，以便合成引物。PCR過程中溫度的控制至關(guān)重要，將處理溫度控制在90～95℃，是為了

使DNA解鏈

使DNA解鏈

。
（2）獲取目的基因后，為了構(gòu)建基因表達(dá)載體，還需要使用的酶是

限制酶、DNA連接酶

限制酶、DNA連接酶

（答出2種）。構(gòu)建成功的基因表達(dá)載體應(yīng)含有的結(jié)構(gòu)有目的基因、啟動子、

終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)

終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)

（答出3種）等結(jié)構(gòu)。
（3）研究人員將TI基因?qū)胧荏w細(xì)胞后進(jìn)行了檢測，相關(guān)步驟和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表所示。該檢測方法依據(jù)的原理是

抗原和抗體的特異性識別與結(jié)合

抗原和抗體的特異性識別與結(jié)合

。據(jù)表分析，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明

TI基因在轉(zhuǎn)基因鹽藻細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)

TI基因在轉(zhuǎn)基因鹽藻細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)

。

組別	實(shí)驗(yàn)步驟			實(shí)驗(yàn)結(jié)果
	①	②	③
轉(zhuǎn)基因鹽藻（A組）	離心收集三組細(xì) 胞制備可溶性蛋 白質(zhì)樣品	將TI注射到大白 兔體內(nèi)，獲取TI 抗體	讓TI抗體和樣品 進(jìn)行混合檢測	有雜交帶
非轉(zhuǎn)基因鹽藻（B組）				無雜交帶
陽性對照組（C組）				有雜交帶