諾如病毒是一種單鏈RNA 病毒,可引起流行性急性腸胃炎的重要病原體。諾如病毒衣殼P蛋白上含有抗原位點(diǎn)和受體識(shí)別位點(diǎn),在體外可單獨(dú)表達(dá),被用于疫苗的免疫實(shí)驗(yàn)研究。
(1)人體感染諾如病毒后,會(huì)引發(fā)特異性免疫(體液免疫)特異性免疫(體液免疫)免疫,在康復(fù)者血清中能夠檢測(cè)到抗體抗體(物質(zhì))。有研究表明感染后第 180 天記憶B細(xì)胞仍具有持久性,說(shuō)明這些細(xì)胞對(duì)機(jī)體具有潛在的長(zhǎng)期保護(hù)(預(yù)防再次感染)潛在的長(zhǎng)期保護(hù)(預(yù)防再次感染)作用。
(2)研究人員希望借P蛋白治療由β蛋白沉積導(dǎo)致的阿爾茨海默癥,選取β蛋白作為免疫原,利用諾如病毒P顆粒作為疫苗載體,研究其免疫原性。研究人員將β蛋白基因插入P蛋白基因的恰當(dāng)位置,制備了重組P蛋白基因P-β(1780bp)后,采用雙酶切方法,通過(guò)NdeⅠ和XhoⅠ酶和pET載體質(zhì)粒(5230bp)構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-P-β,如圖1.對(duì)照組應(yīng)選用②③②③。(多選,填寫各項(xiàng)目前的序號(hào)。)
①諾如病毒RNA
②P蛋白基因與pET載體質(zhì)粒構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET-P
③pET載體質(zhì)粒
(3)為了鑒定重組質(zhì)粒pET-P-β是否構(gòu)建成功,NdeⅠ和XhoⅠ酶分別對(duì)重組質(zhì)粒pET-P-β和pET載體質(zhì)粒進(jìn)行酶切,然后酶切片段和重組P蛋白基因進(jìn)行電泳,請(qǐng)將你判斷的電泳結(jié)果畫到表中對(duì)應(yīng)的泳道上。
DNA標(biāo)記 | P-β | pET | pET-P-β |
Ca2+(CaCl2)
Ca2+(CaCl2)
處理的成為感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞,培養(yǎng)處理后提取蛋白質(zhì)。過(guò)程如下:若干健康小鼠隨機(jī)分為3組,將提取的蛋白質(zhì)分別溶于PBS緩沖液,對(duì)小鼠進(jìn)行皮下免疫,并對(duì)4次免疫后的血清進(jìn)行不同梯度稀釋,用
β蛋白
β蛋白
(β蛋白/P蛋白)作為抗原,通過(guò)免疫法檢測(cè)重組P-β蛋白的免疫原性。如圖2所示,請(qǐng)據(jù)圖描述出能夠表明P-β蛋白可以在小鼠體內(nèi)引起免疫反應(yīng),具有特異的免疫原性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】特異性免疫(體液免疫);抗體;潛在的長(zhǎng)期保護(hù)(預(yù)防再次感染);②③;Ca2+(CaCl2);β蛋白
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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