新冠病毒主蛋白酶（Mpro）可識(shí)別并切割新冠病毒的多聚蛋白質(zhì)，以調(diào)節(jié)新冠病毒RNA的復(fù)制。研究發(fā)現(xiàn)Mpro在進(jìn)化上高度保守，且人類缺乏其同源蛋白酶。實(shí)驗(yàn)小組將新冠病毒的Mpro基因連接到pET-28a載體中構(gòu)建重組質(zhì)粒，再將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌細(xì)胞中，以獲得純化的Mpro,并將純化的Mpro作為抗原免疫小鼠獲得抗Mpro單克隆抗體，為研究Mpro的免疫學(xué)功能奠定基礎(chǔ)?；卮鹣铝袉栴}：
（1）獲得的新冠病毒的Mpro基因需先經(jīng) 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄過程獲得相應(yīng)的DNA片段，再通過 PCRPCR技術(shù)體外擴(kuò)增DNA分子，體外擴(kuò)增DNA分子過程中，每一個(gè)循環(huán)需要經(jīng)過 變性、復(fù)性和延伸變性、復(fù)性和延伸三個(gè)階段。
（2）實(shí)驗(yàn)小組在Mpro基因序列的兩端分別加入NdeⅠ和XhoⅠ酶切位點(diǎn)，再利用雙酶切法將Mpro基因連接到pET-28a載體中，NdeⅠ和XhoⅠ酶的作用是將特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵斷開，利用雙酶切法構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是 防止目的基因和載體的自身環(huán)化及反向連接防止目的基因和載體的自身環(huán)化及反向連接。
（3）純化的Mpro作為抗原免疫小鼠獲得抗Mpro單克隆抗體過程需要經(jīng)過兩次篩選，兩次篩選方法分別為 選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選和專一抗體檢測(cè)選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選和專一抗體檢測(cè)。單克隆抗體的主要優(yōu)點(diǎn)在于 特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可大量制備特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可大量制備。
（4）已知新冠病毒含有多種抗原，且目前已出現(xiàn)了多種新冠病毒變異株。據(jù)題分析，為研發(fā)治療新冠病毒的靶向藥物，選擇Mpro作為抗原制備抗Mpro單克隆抗體的原因是 Mpro在進(jìn)化上高度保守，受病毒變異的影響較小，且人類缺乏其同源蛋白酶，不會(huì)受人類自身酶的影響Mpro在進(jìn)化上高度保守，受病毒變異的影響較小，且人類缺乏其同源蛋白酶，不會(huì)受人類自身酶的影響。
【考點(diǎn)】單克隆抗體及其應(yīng)用；基因表達(dá)載體的構(gòu)建．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；PCR；變性、復(fù)性和延伸；磷酸二酯鍵；防止目的基因和載體的自身環(huán)化及反向連接；選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選和專一抗體檢測(cè)；特異性強(qiáng)、靈敏度高，并可大量制備；Mpro在進(jìn)化上高度保守，受病毒變異的影響較小，且人類缺乏其同源蛋白酶，不會(huì)受人類自身酶的影響
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：2引用：2難度：0.7
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1．CD47是一種跨膜糖蛋白，它可與巨噬細(xì)胞表面的信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，從而抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用。肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞表面的CD47含量比正常細(xì)胞高1.6～5倍，導(dǎo)致吞噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的清除效果減弱?？茖W(xué)家推測(cè)，抗CD47的單克隆抗體可以解除CD47對(duì)巨噬細(xì)胞的抑制作用，為此他們按照如圖流程進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。下列敘述正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：7引用：3難度：0.6 -
2．使用高效的細(xì)胞毒素藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞但細(xì)胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)健康細(xì)胞造成傷害。這限制了它在臨床上的應(yīng)用?？贵w一藥物偶聯(lián)物（ADC）通過將細(xì)胞毒素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細(xì)胞毒素）三部分組成，它的作用機(jī)制如圖所示。下列敘述正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 3:30:1組卷：18引用：2難度：0.7 -
3．雙特異性抗體是指一個(gè)抗體分子可以與兩個(gè)不同抗原或同一抗原的兩個(gè)不同抗原表位相結(jié)合，目前最常利用雜交瘤雜交法來(lái)制備。長(zhǎng)春花是原產(chǎn)于非洲東海岸的野生花卉，其所含的長(zhǎng)春堿具有良好的抗腫瘤作用。圖1是某雙特異性抗體作用圖。圖2是科研人員通過雜交—雜交瘤細(xì)胞技術(shù)（免疫的B淋巴細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞雜交技術(shù)）生產(chǎn)能同時(shí)識(shí)別癌胚抗原和長(zhǎng)春堿的雙特異性單克隆抗體的部分過程。請(qǐng)分析回答下列問題：
（1）與植物體細(xì)胞雜交相比，圖2中過程②特有的誘導(dǎo)融合的方法是，過程②選用的骨髓瘤細(xì)胞（選填“能”或“不能”）在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。
（2）對(duì)③篩選出的雜交瘤細(xì)胞，還需進(jìn)行和，才能篩選出足夠量的既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。與傳統(tǒng)血清抗體相比，單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)是（答出一點(diǎn)）。
（3）圖2中①步驟注射癌胚抗原的目的是。圖2方框內(nèi)需要經(jīng)過次篩選，才能獲取單克隆雜交—雜交瘤細(xì)胞。體外培養(yǎng)到一定時(shí)期的單克隆雜交—雜交瘤細(xì)胞會(huì)因?yàn)?、有害代謝物的積累和培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻，需進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
（4）與直接使用長(zhǎng)春堿相比，將長(zhǎng)春堿與雙特異性單克隆抗體結(jié)合后給藥，對(duì)人體的副作用更小，原因是。發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：21引用：4難度：0.5