B基因存在于水稻基因組中，僅在體細胞（2n）和精子中正常表達，在卵細胞中不轉錄。為研究B基因表達對卵細胞的影響，設計了如下圖所示的實驗來獲取能夠在卵細胞中表達B基因的轉基因植株。請據圖回答下列問題：
（1）從水稻體細胞中提取總RNA，在 逆轉錄逆轉錄酶的催化下構建 cDNAcDNA文庫，進而獲得B基因編碼蛋白的序列。Luc基因是熒光素酶基因，能催化熒光素產生熒光。B-Luc融合基因形成過程中需要的酶是 限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶。
（2）融合基因必須連接到啟動子和終止子之間，其中啟動子是 RNA聚合酶RNA聚合酶的結合位點。圖中卡那霉素抗性基因的作用是 作為標記基因，檢測B-Luc融合基因是否導入農桿菌細胞作為標記基因，檢測B-Luc融合基因是否導入農桿菌細胞。
（3）過程①最常用的方法是 農桿菌轉化法農桿菌轉化法；若借助Luc基因的表達產物來完成圖中第二次鑒定篩選，則具體方法是 檢測加入熒光素的細胞中是否發(fā)出熒光檢測加入熒光素的細胞中是否發(fā)出熒光。
（4）從轉基因水稻植株未成熟種子中分離出胚，觀察到細胞內僅含一個染色體組，判定該胚是由未受精的卵細胞發(fā)育形成的，而一般情況下水稻卵細胞在未受精時不進行發(fā)育，由此表明 B基因表達能使卵細胞不經受精直接發(fā)育成胚B基因表達能使卵細胞不經受精直接發(fā)育成胚。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉錄；cDNA；限制酶和DNA連接酶；RNA聚合酶；作為標記基因，檢測B-Luc融合基因是否導入農桿菌細胞；農桿菌轉化法；檢測加入熒光素的細胞中是否發(fā)出熒光；B基因表達能使卵細胞不經受精直接發(fā)育成胚
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：3難度：0.7
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是 。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2難度：0.6