如表列出了4種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn),其中↓表示切割位點(diǎn);圖1表示含目的基因的DNA結(jié)構(gòu)與限制酶酶切圖譜,其中β鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈;圖2表示某質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)與限制酶酶切圖譜?,F(xiàn)利用表中所列限制酶、圖示目的基因和質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體,進(jìn)而培育轉(zhuǎn)基因植物?;卮鹣铝袉?wèn)題:
限制酶 |
BamHⅠ |
Sau3AⅠ |
BclⅠ |
EcoRⅠ |
識(shí)別序列 |
-G↓GATCC- |
-↓GATC- |
-T↓GATCA- |
-G↓AATTC- |
(1)運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增圖1所示目的基因時(shí),需要選用的引物是引物B和
引物C
引物C
。
(2)為利于目的基因的定向插入和減少隨意連接,處理含目的基因的DNA片段時(shí)應(yīng)選用
BamHⅠ和EcoRⅠ
BamHⅠ和EcoRⅠ
兩種限制酶,圖2中卡那霉素抗性基因的作用是
篩選出含有目的基因的細(xì)胞
篩選出含有目的基因的細(xì)胞
。
(3)Ti質(zhì)粒上的T-DNA具有可轉(zhuǎn)移并整合到受體細(xì)胞
染色體DNA
染色體DNA
上的特性。培育轉(zhuǎn)基因植物時(shí),受體細(xì)胞可以是受精卵或分化的體細(xì)胞,而培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物只能將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵,原因是
高度分化的植物細(xì)胞仍保持著全能性,但動(dòng)物細(xì)胞的全能性會(huì)隨著動(dòng)物細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制
高度分化的植物細(xì)胞仍保持著全能性,但動(dòng)物細(xì)胞的全能性會(huì)隨著動(dòng)物細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制
。
(4)轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞經(jīng)過(guò)
脫分化、再分化
脫分化、再分化
過(guò)程可培育成試管苗,運(yùn)用的是
植物組織培養(yǎng)
植物組織培養(yǎng)
技術(shù)。