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如圖是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程示意圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源，此時AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達(dá)，圖中pPIC9K質(zhì)粒上5′AOX1和3′AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動子和終止子。該酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒，科學(xué)家改造出了圖1所示質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實(shí)現(xiàn)表達(dá)。請回答：
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（1）用PCR技術(shù)擴(kuò)增HBsAg基因時原料是
脫氧核苷酸（dNTP）
脫氧核苷酸（dNTP）
，Taq酶需要
Mg2+
Mg2+
激活。
（2）為實(shí)現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，設(shè)計(jì)引物時需要在引物的
5’
5’
端添加相應(yīng)限制酶的識別序列，則在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置添加的堿基序列分別是
TACGTA
TACGTA
、
CCTAGG
CCTAGG
，這樣設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)是
避免目的基因反向接入質(zhì)粒（保證目的基因定向接入質(zhì)粒）
避免目的基因反向接入質(zhì)粒（保證目的基因定向接入質(zhì)粒）
。
（3）酶切獲取HBsAg基因后，需用
T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，構(gòu)建重組質(zhì)粒的目的是
讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用
讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用
。
（4）若用限制酶SnaBⅠ、BglⅡ聯(lián)合酶切pPIC9K質(zhì)粒，獲得的DNA片段的長度分別是38kb、27kb、67kb；用限制酶BglⅡ、AvrⅡ聯(lián)合酶切pPIC9K質(zhì)粒，得到的DNA片段的長度分別是38kb、40kb、54kb；已知HBsAg基因長度是55kb。步驟3中應(yīng)選用限制酶
BglⅡ
BglⅡ
來切割重組質(zhì)粒以獲得重組DNA，切割后的重組DNA的長度是
136kb
136kb
。
（5）轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，需要向其中加入甲醇，其目的是
誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)
誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)
。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】脫氧核苷酸（dNTP）；Mg2+；5’；TACGTA；CCTAGG；避免目的基因反向接入質(zhì)粒（保證目的基因定向接入質(zhì)粒）；T4DNA連接酶；讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用；BglⅡ；136kb；誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：2引用：2難度：0.6
相似題

  • 1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 2．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進(jìn)行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)模化生產(chǎn)目標(biāo)蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
    ⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當(dāng)復(fù)制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計(jì)的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實(shí)驗(yàn)操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進(jìn)行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5

  • 3．用限制酶EcoRⅤ單獨(dú)切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨(dú)切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
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