基因檢測是指通過檢測生物體中的DNA序列，以了解生物體基因狀況的技術(shù)手段。Sanger雙脫氧鏈終止法是DNA測序的基本方法，其原理是：核酸模板在核酸聚合酶、帶有3′-OH末端的單鏈核苷酸引物、四種dNTP存在的條件下復(fù)制或轉(zhuǎn)錄時，如果在反應(yīng)系統(tǒng)中分別引入單一種類的ddNTP（即2、3雙脫氧核苷三磷酸，在脫氧核糖的3′位置缺少一個羥基，故不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵），只要ddNTP摻入鏈端，該鏈就停止延長，鏈端摻入dNTP的片段可繼續(xù)延長。通過電泳將不同長度的片段分開，DNA片段越小，距離起點越遠(yuǎn)，根據(jù)末端核苷酸可得到原始序列信息。具體流程圖如圖1。

（1）若待測核酸模板為雙鏈DNA，首先要作

變性

變性

處理，與引物結(jié)合后，在DNA聚合酶作用下子鏈沿

從5′端向3′端

從5′端向3′端

方向（填“5′端向3′端”或“3′端向5′端”）進(jìn)行延伸反應(yīng)。若待測核酸模板為RNA，則需要在

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

酶的幫助下合成DNA單鏈片段。
（2）ddNTP為2，3-雙脫氧核苷三磷酸，只要ddNTP摻入鏈端，該鏈就停止延長的原因是

3號碳上不是羥基，不能與下一個脫氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯鍵

3號碳上不是羥基，不能與下一個脫氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯鍵

。
（3）假設(shè)某反應(yīng)體系中，待測DNA單鏈序列3′GTACCGTA5′，加入4種dNTP和ddATP，經(jīng)過雙脫氧鏈終止法處理，會得到

3

3

種片段，其中最短的片段序列是

CddA

CddA

。
（4）假設(shè)某次Sanger雙脫氧鏈終止法測序得到的電泳圖如圖2所示，則待測DNA序列從5′端到3′端為

ACTACTGGTA

ACTACTGGTA

。