酯酶結合熒光分析法可對有機磷和氨基甲酸酯類農藥進行檢測，某研究院利用轉基因技術獲得一種催化效率高、農藥敏感性強的微生物酯酶。
（1）人工合成酯酶基因后通過PCR技術可實現擴增，為該過程提供能量的是 dNTPdNTP；還需要設計兩種引物，設計引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的 3′端3′端開始連接脫氧核苷酸。為方便構建重組質粒，需要在引物的5′端設計 限制（性內切核酸）限制（性內切核酸）酶的識別序列。某質粒圖譜和目的基因的序列如圖所示，應選擇引物 ①③①③（填數字）。（①-④中加粗表示識別序列前的保護堿基，增強上述酶與目的基因的結合。）
①5′-CCGGAATTCATGCTTGATATGCCAATC-3′
②5′-CCCAAGCTTTACGAACTATACGGTTAG-3′
③5′-CCCAAGCTTCTAGTCGAACACAAGAAG-3′
④5′-CCGGAATTCGATCAGCTTGTGTTCTTC-3′
（2）若提取高產酯酶野生菌的基因組DNA，用設計的引物和合適的條件進行PCR，其產物可用 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳鑒定。結果發(fā)現有目的基因以外的雜帶存在，分析可能原因是：在基因組DNA中有其他引物結合的位點/引物特異性不強/引物過短在基因組DNA中有其他引物結合的位點/引物特異性不強/引物過短。
解決措施：在目的基因的 上、下游上、下游（填“內部”或“上、下游”）重新設計引物進行PCR。
（3）將PCR產物和質粒用限制酶酶切，酶切產物純化后，用DNA連接酶連接，這一操作的目的是 讓目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用讓目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】dNTP；3′端；限制（性內切核酸）；①③；瓊脂糖凝膠電泳；在基因組DNA中有其他引物結合的位點/引物特異性不強/引物過短；上、下游；讓目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：6引用：1難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2難度：0.6 -
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