酯酶結(jié)合熒光分析法可對(duì)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行檢測(cè)，某研究院利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得一種催化效率高、農(nóng)藥敏感性強(qiáng)的微生物酯酶。
（1）人工合成酯酶基因后通過(guò)PCR技術(shù)可實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增，為該過(guò)程提供能量的是 dNTPdNTP；還需要設(shè)計(jì)兩種引物，設(shè)計(jì)引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的 3′端3′端開始連接脫氧核苷酸。為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要在引物的5′端設(shè)計(jì) 限制（性內(nèi)切核酸）限制（性內(nèi)切核酸）酶的識(shí)別序列。某質(zhì)粒圖譜和目的基因的序列如圖所示，應(yīng)選擇引物 ①③①③（填數(shù)字）。（①-④中加粗表示識(shí)別序列前的保護(hù)堿基，增強(qiáng)上述酶與目的基因的結(jié)合。）
①5′-CCGGAATTCATGCTTGATATGCCAATC-3′
②5′-CCCAAGCTTTACGAACTATACGGTTAG-3′
③5′-CCCAAGCTTCTAGTCGAACACAAGAAG-3′
④5′-CCGGAATTCGATCAGCTTGTGTTCTTC-3′
（2）若提取高產(chǎn)酯酶野生菌的基因組DNA，用設(shè)計(jì)的引物和合適的條件進(jìn)行PCR，其產(chǎn)物可用 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)有目的基因以外的雜帶存在，分析可能原因是：在基因組DNA中有其他引物結(jié)合的位點(diǎn)/引物特異性不強(qiáng)/引物過(guò)短在基因組DNA中有其他引物結(jié)合的位點(diǎn)/引物特異性不強(qiáng)/引物過(guò)短。
解決措施：在目的基因的 上、下游上、下游（填“內(nèi)部”或“上、下游”）重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR。
（3）將PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒用限制酶酶切，酶切產(chǎn)物純化后，用DNA連接酶連接，這一操作的目的是 讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】dNTP；3′端；限制（性內(nèi)切核酸）；①③；瓊脂糖凝膠電泳；在基因組DNA中有其他引物結(jié)合的位點(diǎn)/引物特異性不強(qiáng)/引物過(guò)短；上、下游；讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：6引用：1難度：0.6
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
2．煙草是我國(guó)一些地區(qū)的經(jīng)濟(jì)作物之一，提高煙草質(zhì)量有利于提高經(jīng)濟(jì)收入。我國(guó)科研團(tuán)隊(duì)研究了一種轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種，抗鹽基因的結(jié)構(gòu)和獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過(guò)程（①～⑤）如圖所示。回答下列問(wèn)題：
（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過(guò)程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對(duì)目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過(guò)程（填序號(hào)）。過(guò)程②③采用的方法是。
（4）⑤過(guò)程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過(guò)程中，這兩種植物激素的比例會(huì)發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
3．如表為5種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)，如圖為某種質(zhì)粒和目的基因，箭頭所指為限制酶酶切位點(diǎn)。現(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中，以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說(shuō)法正確的是（ ?。?
限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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