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用DNA重組技術(shù)可以賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人類需要的生物產(chǎn)品。在此過程中需要使用多種工具酶，其中4種限制性核酸內(nèi)切酶的切割位點(diǎn)如圖所示。

回答下列問題：
（1）常用的DNA鏈接酶有E.coli DNA連接酶和T₄DNA連接酶。如圖中
EcoRⅠ、PstⅠ
EcoRⅠ、PstⅠ
酶切割后的DNA片段可以用E.coli DNA連接酶連接。如圖中
EcoRⅠ、PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅤ
EcoRⅠ、PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅤ
酶切割后的DNA片段可以用T₄DNA連接酶連接。
（2）DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段之間形成的化學(xué)鍵是
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
。
（3）DNA重組技術(shù)中所用的質(zhì)粒載體具有一些特征，如質(zhì)粒DNA分子上有復(fù)制原點(diǎn)，可以保證質(zhì)粒在受體細(xì)胞中能
自我復(fù)制、穩(wěn)定存在
自我復(fù)制、穩(wěn)定存在
；質(zhì)粒DNA分子上有
一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn)
一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn)
便于外源DNA插入；質(zhì)粒DNA分子上有標(biāo)記基因（如某種抗生素抗性基因）。利用抗生素可篩選出含質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞，方法是
用含該抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)宿主細(xì)胞
用含該抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)宿主細(xì)胞
。
（4）表達(dá)載體含有啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是指
轉(zhuǎn)錄開始的地方，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)
轉(zhuǎn)錄開始的地方，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)
。

【答案】EcoRⅠ、PstⅠ；EcoRⅠ、PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅤ；磷酸二酯鍵；自我復(fù)制、穩(wěn)定存在；一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn)；用含該抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)宿主細(xì)胞；轉(zhuǎn)錄開始的地方，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)

【解答】

【點(diǎn)評(píng)】

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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：600引用：7難度：0.6

相似題

1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?br />

A．若某基因是從人的細(xì)胞內(nèi)提取mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的，則該基因中不含啟動(dòng)子序列

B．?dāng)U增目的基因時(shí)，利用耐高溫的DNA連接酶從引物a、b的3′-端進(jìn)行子鏈合成

C．導(dǎo)入人血清白蛋白基因的綿羊受體細(xì)胞是乳腺細(xì)胞

D．利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將含有目的基因的重組質(zhì)粒整合到植物受體細(xì)胞的染色體DNA上

發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

解析

2．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會(huì)引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命，因此必須對(duì)食品中生物胺的含量進(jìn)行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國(guó)科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。
（1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是

（填寫下列編號(hào)）。
①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
②選用合適的方法獲取目的基因
③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標(biāo)蛋白
④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
（2）在PCR過程中，引物的功能是

。
A．啟動(dòng)DNA復(fù)制
B．規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
C．解旋DNA雙鏈
D．充當(dāng)復(fù)制模板

（3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計(jì)的PCR引物應(yīng)為圖甲中的

。
（4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是

（填DNA或RNA/DNA或RNA）。
（5）在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中，溫度隨時(shí)間的變化順序是圖乙中的

。
（6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用

和

切開，才能與MCO片段高效連接。
（7）下列實(shí)驗(yàn)操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是

。
A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進(jìn)行PCR檢測(cè)
D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長(zhǎng)與否加以鑒別
發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
解析
3．用限制酶EcoRⅤ單獨(dú)切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個(gè)堿基對(duì)）的長(zhǎng)鏈，而同時(shí)用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長(zhǎng)度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個(gè)黏性末端）。

若用MboⅠ限制酶單獨(dú)切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長(zhǎng)度為（　?。?/h2>
A．2.5和5.5 B．2.5和6 C．5.5和8 D．6和8
發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
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1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ?。?br />

1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?br />