研究人員利用魚類腸道菌株MA35提取纖維素酶,按照“纖維素酶制備→纖維素酶純化和鑒定→纖維素酶活力檢測→纖維素酶酶學性質(zhì)研究”的思路開展研究?;卮鹣铝袉栴}:
(1)從魚類腸道中提取菌體后接種到 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng),發(fā)酵完畢后將菌體與發(fā)酵液分離,菌體再加入緩沖液重新懸浮,利用超聲波破碎細胞。制備纖維素粗酶液的思路是 將發(fā)酵液和細菌破碎液進行離心分離將發(fā)酵液和細菌破碎液進行離心分離。
(2)對獲得的纖維素粗酶液用凝膠色譜柱進行洗脫,該方法純化纖維素酶的原理是 不同質(zhì)量的蛋白質(zhì)在凝膠中的移動路線長短和移動的速度不同不同質(zhì)量的蛋白質(zhì)在凝膠中的移動路線長短和移動的速度不同。純化后的纖維素酶使用 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法進行純度鑒定。
(3)測定酶活力時,需要以 煮沸滅菌煮沸滅菌的酶液作為對照組。實驗組酶液加入羧甲基纖維素鈉溶液,反應(yīng)30 min后終止反應(yīng),以每分鐘釋放1 mmol 葡萄糖葡萄糖所需要的酶量作為1個酶活力單位。設(shè)置30~80℃,pH為3.0~10.0的條件進行纖維素酶酶學性質(zhì)研究,主要目的是 探究纖維素酶的最適溫度和最適pH探究纖維素酶的最適溫度和最適pH。
【答案】液體培養(yǎng)基;將發(fā)酵液和細菌破碎液進行離心分離;不同質(zhì)量的蛋白質(zhì)在凝膠中的移動路線長短和移動的速度不同;SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳;煮沸滅菌;葡萄糖;探究纖維素酶的最適溫度和最適pH
【解答】
【點評】
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