科研人員建立了一種新的靶向基因敲除技術(shù)——TALEN技術(shù)。TALEN技術(shù)使用的基因敲除工具是由DNA識(shí)別域和核酸內(nèi)切酶兩個(gè)部分組成的蛋白質(zhì)?？茖W(xué)家發(fā)現(xiàn)了一種細(xì)菌蛋白質(zhì)（TALE），它的二連氨基酸（NI、NG、HD、NN，其中字母N、I、G、H、D分別代表一種氨基酸）與四種堿基（A、G、C、T）有恒定的對(duì)應(yīng)關(guān)系：NI識(shí)別A，NG識(shí)別T，HD識(shí)別C，NN識(shí)別G。FokⅠ是一種形成二聚體后具有核酸內(nèi)切酶活性的蛋白單體。因此，可以利用TALE作為DNA識(shí)別域，用FokⅠ二聚體定點(diǎn)切斷DNA。

科學(xué)家發(fā)現(xiàn)水稻植株無(wú)論是否具有光周期敏感蛋白基因P，在短日照條件下均表現(xiàn)為雄性可育。在長(zhǎng)日照條件下，具有光周期敏感蛋白的水稻才能雄性可育?；騊只在單倍體花粉細(xì)胞中表達(dá)，使其能夠合成淀粉?？蒲腥藛T使用TALEN技術(shù)對(duì)水稻基因P進(jìn)行靶向敲除，得到光敏雄性不育水稻新品種。
（1）沒(méi)有與TALE蛋白結(jié)合的FokⅠ二聚體對(duì)DNA的切割應(yīng)

不具有

不具有

（選填“具有”或“不具有”）類(lèi)似于限制酶的“限制性”。
（2）若TALE蛋白左臂所識(shí)別的基因P的序列為“-TGACC-”，則TALE蛋白左臂對(duì)應(yīng)的二連氨基酸序列應(yīng)為

-NG/NN/NI/HD/HD-

-NG/NN/NI/HD/HD-

。用這種方法，可以確定TALE蛋白的氨基酸序列，進(jìn)而人工合成TALE蛋白基因。然后將TALE蛋白基因與

FokI單體

FokI單體

基因進(jìn)行融合，得到融合基因。
（3）科研人員用圖2所示的質(zhì)粒為載體，其中的潮霉素抗性基因作為標(biāo)記基因，作用是

篩選轉(zhuǎn)化成功的受體細(xì)胞

篩選轉(zhuǎn)化成功的受體細(xì)胞

。應(yīng)選用

BamHⅠ

BamHⅠ

和

DNA連接

DNA連接

酶將該質(zhì)粒與融合基因構(gòu)建為重組質(zhì)粒，并將融合基因設(shè)法導(dǎo)入到水稻愈傷組織中，再利用

植物組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)

技術(shù)獲得T₀代植株。
（4）為獲得光敏雄性不育轉(zhuǎn)基因純合子，科研人員將T₀代植株在

短

短

日照條件種植，待其自花受粉得到T₁代，再將T₁代植株在

長(zhǎng)

長(zhǎng)

日照條件種植，并在開(kāi)花期隨機(jī)選擇一部分植株的花粉用碘液染色后，在顯微鏡下觀察。若觀察到某植株的花粉

全部未染色成藍(lán)色

全部未染色成藍(lán)色

，則該植株為所需的純合光敏雄性不育新品種。
（5）與傳統(tǒng)的雄性不育水稻品種相比，光敏雄性不育新品種的優(yōu)勢(shì)在于它敲除了基因P，使其既能在

短日照

短日照

條件下實(shí)現(xiàn)

自交

自交

留種，又能保留在長(zhǎng)日照條件下

雌性不育

雌性不育

的特性以便用于雜交育種。