病菌感染首蓓，對(duì)首蓓的產(chǎn)量和品質(zhì)有很多的影響，研究人員將溶菌酶基因（LYZ基因）和綠色熒光蛋白基因（GFP基因）連接為LYZ一GFP基因，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入到苜蓿中。本實(shí)驗(yàn)中使用圖1所示質(zhì)粒構(gòu)建載體，Vir區(qū)的基因產(chǎn)物是T一DNA整合到植物基因組中的必備條件，圖2表示含有LYZ一GFP基因的DNA片段。圖中箭頭表示相應(yīng)限制酶的酶切位點(diǎn)，酶級(jí)形成的末端均為私性末端，據(jù)圖回答問題：

（1）用PCR法對(duì)圖2所示基因片段進(jìn)行擴(kuò)增，并將產(chǎn)物用限制酶Ⅰ進(jìn)行切割，質(zhì)粒用同樣的限制酶切割，用DNA連接酶進(jìn)行連接。只考慮兩段不同DNA片段相連（不考慮自身的連接）的情況所得到的環(huán)狀DNA分子有

2

2

種。
（2）本實(shí)驗(yàn)中的目的基因是

溶菌酶基因（或LYZ基因）

溶菌酶基因（或LYZ基因）

，最佳的限制酶的選擇是

限制酶I、限制酶Ⅲ

限制酶I、限制酶Ⅲ

。在鑒別首蓓細(xì)胞中是否含有目的基因的時(shí)候，研究者可選擇的標(biāo)記基因有

卡那霉素抗性基因和綠色熒光蛋

卡那霉素抗性基因和綠色熒光蛋

。
（3）目的基因在體外擴(kuò)增時(shí)，與體內(nèi)復(fù)制的區(qū)別在于

體外擴(kuò)增過程不霱要解旋酶

體外擴(kuò)增過程不霱要解旋酶

。
（4）目的基因的表達(dá)產(chǎn)物在植物體中發(fā)揮作用時(shí)

不具有

不具有

（填“具有”或“不具有”）特異性。