真核基因的轉(zhuǎn)錄激活因子是兩種相對獨(dú)立的蛋白質(zhì)BD和AD組成的復(fù)合物，BD負(fù)責(zé)識別基因上游特定的DNA序列并與之結(jié)合（不同基因的BD不同），AD負(fù)責(zé)活化轉(zhuǎn)錄過程，兩者單獨(dú)作用時(shí)都不能啟動轉(zhuǎn)錄。在科學(xué)研究中，往往利用該原理判斷兩種蛋白質(zhì)能否相互作用。具 體過程為：讓BD基因與誘餌蛋白基因融合，讓AD基因與待測蛋白基因融合，并讓它們在酵母菌中表達(dá)出相應(yīng)的融合蛋白，若誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成 復(fù)合物，并啟動標(biāo)記基因的表達(dá)。具體過程如圖
（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒甲時(shí)使用雙酶切可以有效防止目的基因與質(zhì)粒 自身環(huán)化、反向連接自身環(huán)化、反向連接；用EcoRⅠ和SalⅠ雙酶切后，檢測樣品1、2中是否含有重組質(zhì)粒乙，電泳結(jié)果為圖2，其中 11號樣品為成功插入AD-待測蛋白基因的重組質(zhì)粒。
（2）質(zhì)粒導(dǎo)入前，Y2H酵母菌母液需用無菌的Ca2+處理，推測其目的是 使Y2H酵母菌細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)使Y2H酵母菌細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)。與原核細(xì)胞相比，由于酵母菌 有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進(jìn)行加工有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進(jìn)行加工，故蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象不受影響，這也是選擇其作為受體細(xì)胞的原因之一。
（3）野生型Y2H酵母菌缺乏His3（組氨酸合成基因）和Mell（半乳糖苷酶合成基因），故可將這兩種基因作為標(biāo)記基因?qū)隮2H酵母菌將其制備成受體菌，來判斷誘餌蛋白與待測蛋白能否相互作用。（已知在培養(yǎng)基中含有X-gal的情況下，半乳糖苷酶的分泌可使酵母菌落呈藍(lán)色）。將重組質(zhì)粒甲和乙導(dǎo)入受體菌后，若受體菌菌落在不含組氨酸的平板上能存活且在含有X-gal 的平板上呈現(xiàn)藍(lán)色，則說明誘餌蛋白和待測蛋白能相互作用，理由是 誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復(fù)合物，并啟動兩種標(biāo)記基因表達(dá)誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復(fù)合物，并啟動兩種標(biāo)記基因表達(dá)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】自身環(huán)化、反向連接；1；使Y2H酵母菌細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)；有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進(jìn)行加工；誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復(fù)合物，并啟動兩種標(biāo)記基因表達(dá)
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：6引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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