科研人員將寒帶地區(qū)海魚(yú)體內(nèi)的抗凍基因?qū)肭ъㄒ环N番茄品種）細(xì)胞，成功培育出抗凍千禧果。如圖為培育過(guò)程中使用的 Ti質(zhì)粒示意圖，其中 Vir區(qū)的基因活化能促進(jìn)T-DNA的加工和轉(zhuǎn)移?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）將抗凍基因的mRNA逆轉(zhuǎn)錄后，再進(jìn)行PCR可獲得抗凍基因，該過(guò)程中所需要的酶是

逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶

逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶

。每次PCR循環(huán)分為3步。其中所需溫度最低的一步的目的是

使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA 鏈上

使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA 鏈上

。
（2）抗凍基因不能直接導(dǎo)入受體細(xì)胞，需要構(gòu)建抗凍基因表達(dá)載體，構(gòu)建抗凍基因表達(dá)載體的目的是

有利于抗凍基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并遺傳給下一代；有利于抗凍基因在受體細(xì)胞中表達(dá)和發(fā)揮作用

有利于抗凍基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并遺傳給下一代；有利于抗凍基因在受體細(xì)胞中表達(dá)和發(fā)揮作用

（答出1點(diǎn)）。
（3）選擇圖中 Ti質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，不能選擇限制酶Ⅱ切割 Ti質(zhì)粒。原因是

限制酶Ⅱ會(huì)破壞Vir區(qū)基因

限制酶Ⅱ會(huì)破壞Vir區(qū)基因

。最好選擇限制酶

Ⅲ

Ⅲ

構(gòu)建基因表達(dá)載體。
（4）為篩選成功導(dǎo)入抗凍基因的千禧果細(xì)胞，最好在培養(yǎng)基中添加

四環(huán)素

四環(huán)素

，將成功轉(zhuǎn)化的千禧果細(xì)胞誘導(dǎo)培育成植株，最后在

低溫（或寒冷）

低溫（或寒冷）

條件下篩選出具有抗凍性狀的千禧果植株。