為增加油菜種子的含油量,研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連,導(dǎo)入油菜細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種。回答下列問題:
(1)酶D基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因所含的三種限制酶(ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ)的切點(diǎn)如圖甲所示,現(xiàn)為獲得融合基因,研究人員采用PCR法擴(kuò)增酶D基因,首先要依據(jù)基因兩端的堿基序列設(shè)計(jì)
引物
引物
,同時(shí)從擬南芥基因文庫(kù)中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因,再用
ClaⅠ
ClaⅠ
和
DNA 連接
DNA 連接
酶處理兩個(gè)基因后,即可得到
A
A
端與
D
D
端(填圖中字母)相連的融合基因。
(2)將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的TDNA中,構(gòu)建
基因表達(dá)載體(或重組質(zhì)粒)
基因表達(dá)載體(或重組質(zhì)粒)
并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含
四環(huán)素
四環(huán)素
的培養(yǎng)基上,其目的是得到含融合基因的農(nóng)桿菌,再利用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng),可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液。
(3)剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間,此過程的目的是
利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)胗筒思?xì)胞
利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)胗筒思?xì)胞
,進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞,該細(xì)胞通過
植物組織培養(yǎng)
植物組織培養(yǎng)
技術(shù),可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株。