番茄果實(shí)多呈扁球形,研究者從番茄突變體庫中獲得一長果形突變體M,并以其為材料對番茄果實(shí)形狀的調(diào)控機(jī)制展開研究。
(1)將突變體M與野生型番茄雜交,F(xiàn)1自交后代表現(xiàn)為
扁球形:長果形≈3:1
扁球形:長果形≈3:1
,說明長果形是單基因隱性突變導(dǎo)致?;騇為突變基因,如圖1為兩種番茄M基因cDNA(轉(zhuǎn)錄的非模板鏈)的部分測序結(jié)果。
據(jù)此,突變體M的M基因發(fā)生 堿基對的缺失和替換
堿基對的缺失和替換
造成蛋白質(zhì)翻譯在第 443
443
位氨基酸后提前終止(終止密碼子:UAA、UAG、UGA)。
(2)M基因編碼棕櫚酰胺轉(zhuǎn)移酶(M酶),可催化蛋白P發(fā)生棕櫚酰胺化修飾。敲除野生型番茄P基因獲得果實(shí)變長的突變P,將人為突變的P基因(編碼產(chǎn)物的棕構(gòu)酰胺化位點(diǎn)失活)在突變體P中超表達(dá),結(jié)果如圖2。
為實(shí)現(xiàn)P基因的超表達(dá),需要在基因工程中 構(gòu)建基因表達(dá)載體
構(gòu)建基因表達(dá)載體
時(shí)選擇合適的啟動子。圖2結(jié)果說明蛋白P對番茄果形的調(diào)控與M酶對蛋白P的棕櫚化修飾無關(guān),做出判斷的依據(jù)是轉(zhuǎn)P基因和轉(zhuǎn)突變P基因的突變體P均基本恢復(fù)正常果形
轉(zhuǎn)P基因和轉(zhuǎn)突變P基因的突變體P均基本恢復(fù)正常果形
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(3)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),蛋白C也會被M酶棕櫚酰胺化修飾,修飾后的蛋白C會與蛋白P結(jié)合促進(jìn)微管聚合,影響細(xì)胞形態(tài)。綜合以上信息解釋突變體M長果形成因:基因M突變引起M酶失活,無法催化蛋白C棕櫚酰胺化修飾,導(dǎo)致蛋白C不能與蛋白P結(jié)合,進(jìn)而使得細(xì)胞中微管無法聚合細(xì)胞形態(tài)改變,果實(shí)發(fā)育成為長果
基因M突變引起M酶失活,無法催化蛋白C棕櫚酰胺化修飾,導(dǎo)致蛋白C不能與蛋白P結(jié)合,進(jìn)而使得細(xì)胞中微管無法聚合細(xì)胞形態(tài)改變,果實(shí)發(fā)育成為長果
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