為了提高馬鈴薯對真菌病害的抗性，某科研小組進(jìn)行了馬鈴薯轉(zhuǎn)基因抗病育種的初步研究，其過程如下所示，請將其完善：
（1）從生防木霉菌株中提取總RNA以及通過 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄過程合成cDNA。
（2）利用PCR技術(shù)對目的基因Chi（抗菌基因）進(jìn)行擴(kuò)增；PCR產(chǎn)物與PMDTM18-T載體連接，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌，獲得重組質(zhì)粒PMDTM18-T-Chi。
（2）植物表達(dá)載體的構(gòu)建（如圖所示）：將重組質(zhì)粒PMDTM18-T-Chi和p33ECR質(zhì)粒用 BamHI和SacIBamHI和SacI（填具體酶）進(jìn)行酶切，再用T4DNA連接酶連接，得到p33ECR-Chi。此過程中一般會(huì)使用高濃度的T4DNA連接酶，T4DNA連接酶的作用是 既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，又可以“縫合“雙鏈DNA片段的平末端既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，又可以“縫合“雙鏈DNA片段的平末端。表達(dá)載體中p35S是 RNA聚合酶RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。
（3）p33ECR-Chi工程菌的獲得：將p33ECR-Chi質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌菌株中，在含 氨芐青霉素氨芐青霉素的培養(yǎng)基上獲得白色菌斑，挑菌落，獲得工程菌。
（4）轉(zhuǎn)基因植株的獲得：通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將Chi基因轉(zhuǎn)化到馬鈴薯栽培品種試管馬鈴薯的塊莖中。試管馬鈴薯的塊莖是馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化的理想外植體，分析其具有的優(yōu)點(diǎn)是 取材方便、無需滅菌、周期短、轉(zhuǎn)化效率高和不定芽能直接再生取材方便、無需滅菌、周期短、轉(zhuǎn)化效率高和不定芽能直接再生（寫出兩點(diǎn)）。
（5）對馬鈴薯進(jìn)行抗菌檢測：從分子水平上可采用 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交法檢測目的基因表達(dá)的產(chǎn)物；從個(gè)體水平上進(jìn)行檢測的操作是 霉菌接種實(shí)驗(yàn)霉菌接種實(shí)驗(yàn)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；BamHI和SacI；既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，又可以“縫合“雙鏈DNA片段的平末端；RNA聚合酶；氨芐青霉素；取材方便、無需滅菌、周期短、轉(zhuǎn)化效率高和不定芽能直接再生；抗原—抗體雜交；霉菌接種實(shí)驗(yàn)
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：8引用：3難度：0.6
相似題
-
1．紅細(xì)胞生成素（EPO）是人體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然 EPO來源極為有限，某科研團(tuán)隊(duì)采用基因工程培育轉(zhuǎn)基因羊作為乳腺生物反應(yīng)器，使其能合成EPO。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
2．煙草是我國一些地區(qū)的經(jīng)濟(jì)作物之一，提高煙草質(zhì)量有利于提高經(jīng)濟(jì)收入。我國科研團(tuán)隊(duì)研究了一種轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種，抗鹽基因的結(jié)構(gòu)和獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程（①～⑤）如圖所示。回答下列問題：
（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號(hào)）。過程②③采用的方法是。
（4）⑤過程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中，這兩種植物激素的比例會(huì)發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
3．如表為5種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)，如圖為某種質(zhì)粒和目的基因，箭頭所指為限制酶酶切位點(diǎn)。現(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中，以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說法正確的是（ ）
限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
把好題分享給你的好友吧~~