胰島素作為治療糖尿病的特效藥，市場潛力巨大，科學家利用轉基因技術獲得轉入胰島素基因的大腸桿菌，通過發(fā)酵工程，實現(xiàn)胰島素的大量生產。圖1表示胰島素基因及其上的限制酶酶切位點，圖2表示所用質粒的結構?；卮鹨韵聠栴}。
（1）已知DNA復制時，子鏈延伸的方向是從5′→3′，即沿著模板鏈的3′→5′。若要擴增出胰島素基因并用于表達載體的構建，應選擇的引物是
引物1和引物8
引物1和引物8
，選擇這兩種引物的原因是 既能保證正常合成子鏈，又包含限制酶切割位點
既能保證正常合成子鏈，又包含限制酶切割位點
。若要得到胰島素基因，至少經過 3
3
次循環(huán)。
（2）構建基因表達載體時，最好選擇的限制酶是 BamHⅠ和HindⅢ
BamHⅠ和HindⅢ
，原因是 既能防止質粒自身環(huán)化，又可以保證目的基因正確連接在質粒上
既能防止質粒自身環(huán)化，又可以保證目的基因正確連接在質粒上
。
（3）將重組質粒導入大腸桿菌時，需用 Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌，其目的是 使大腸桿菌變?yōu)楦惺軕B(tài)細胞，便于從周圍環(huán)境吸收DNA分子
使大腸桿菌變?yōu)楦惺軕B(tài)細胞，便于從周圍環(huán)境吸收DNA分子
。
（4）為了將成功導入重組質粒的大腸桿菌篩選出來，甲同學在加入氨芐青霉素的培養(yǎng)基中進行接種，結果如圖3。乙同學認為該結果得到的菌落并不都是成功導入重組質粒的大腸桿菌，你認為乙同學判斷的理由是 只導入了質粒的大腸桿菌也能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上形成菌落
只導入了質粒的大腸桿菌也能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上形成菌落
。
