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真核基因的轉(zhuǎn)錄激活因子是兩種相對獨立的蛋白質(zhì)BD和AD組成的復合物，BD負責識別基因上游特定的DNA序列并與之結(jié)合（不同基因的BD不同），AD負責活化轉(zhuǎn)錄過程，兩者單獨作用時都不能啟動轉(zhuǎn)錄。在科學研究中，往往利用該原理判斷兩種蛋白質(zhì)能否相互作用。具體過程為：讓BD基因與誘餌蛋白基因融合，讓AD基因與待測蛋白基因融合，并讓它們在酵母菌中表達出相應(yīng)的融合蛋白，若誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復合物，并啟動標記基因的表達。具體過程如圖1：菁優(yōu)網(wǎng)
（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒甲時使用雙酶切可以有效防止目的基因與質(zhì)粒
自身環(huán)化、反向連接
自身環(huán)化、反向連接
；用EcoRⅠ和SalⅠ雙酶切后，檢測樣品1、2中是否含有重組質(zhì)粒乙，電泳結(jié)果為圖2，其中
1
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號樣品為成功插入AD—待測蛋白基因的重組質(zhì)粒。
（2）質(zhì)粒導入前，Y2H酵母菌母液需用無菌的Ca2+處理，推測其目的是
使Y2H酵母菌細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)
使Y2H酵母菌細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)
。與原核細胞相比，由于酵母菌
有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進行加工
有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進行加工
，故蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象不受影響，這也是選擇其作為受體細胞的原因之一。
（3）野生型Y2H酵母菌缺乏His3（組氨酸合成基因）和Mell（半乳糖苷酶合成基因），故可將這兩種基因作為標記基因?qū)隮2H酵母菌將其制備成受體菌，來判斷誘餌蛋白與待測蛋白能否相互作用。（已知在培養(yǎng)基中含有X—gal的情況下，半乳糖苷酶的分泌可使酵母菌落呈藍色）
①將重組質(zhì)粒甲和乙導入受體菌后，若受體菌菌落在不含組氨酸的平板上能存活且在含有X—gal的平板上呈現(xiàn)藍色，則說明誘餌蛋白和待測蛋白能相互作用，理由是
誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復合物，并啟動兩種標記基因表達
誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復合物，并啟動兩種標記基因表達
。
②請設(shè)計實驗排除BD—誘餌融合蛋白單獨激活兩種標記基因的可能。（寫出實驗思路和結(jié)果）

【答案】自身環(huán)化、反向連接；1；使Y2H酵母菌細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)；有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進行加工；誘餌蛋白與待測蛋白可以相互作用，則AD和BD就能充分接近形成復合物，并啟動兩種標記基因表達
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：17引用：2難度：0.6
相似題

  • 1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　　）
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    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 2．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)模化生產(chǎn)目標蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細胞
    ⑤目的基因和運載體重組構(gòu)建表達載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復制
    B．規(guī)定擴增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當復制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導入受體細胞。載體的化學本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應(yīng)中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5

  • 3．用限制酶EcoRⅤ單獨切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
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