人類胰島素基因位于第11號染色體上,長度8416bp,包含3個外顯子和2個內(nèi)含子,人類胰島素的氨基酸序列已知。回答相關(guān)問題:
(1)如圖是利用PCR技術(shù)獲取人胰島素基因的方法,除了此方法外,還可以利用的方法是
從基因文庫獲取或人工合成
從基因文庫獲取或人工合成
。
(2)利用PCR技術(shù)獲取人胰島素基因,在緩沖液中除了要添加模板和引物外,還需要添加的物質(zhì)有四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)
四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)
。
(3)經(jīng)過3
3
輪循環(huán)可以得到所需的目的基因,一個DNA分子經(jīng)過5輪循環(huán),需要引物A31
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個,從PCR的過程和DNA分子的特點(diǎn),試著寫出設(shè)計(jì)引物需要注意的問題引物自身不能有互補(bǔ)序列 引物之間不能有互補(bǔ)序列、引物長度適當(dāng)、引物能與目的基因兩側(cè)特異性結(jié)合、避免與擴(kuò)增DNA內(nèi)有過多互補(bǔ)的序列
引物自身不能有互補(bǔ)序列 引物之間不能有互補(bǔ)序列、引物長度適當(dāng)、引物能與目的基因兩側(cè)特異性結(jié)合、避免與擴(kuò)增DNA內(nèi)有過多互補(bǔ)的序列
(答出2點(diǎn)即可)。
(4)利用SDS-凝膠電泳分離不同DNA分子,遷移速度取決于DNA分子的大小
DNA分子的大小
。
(5)利用圖示方法獲取的目的基因,直接構(gòu)建基因表達(dá)載體后導(dǎo)入大腸桿菌,能不能表達(dá)出人胰島素,判斷并說明理由不能,因?yàn)榇朔椒ǐ@得的目的基因中含有內(nèi)含子,大腸桿菌無法正常識別內(nèi)含子而對內(nèi)含子部分轉(zhuǎn)錄的mRNA進(jìn)行翻譯,導(dǎo)致合成的蛋白質(zhì)出現(xiàn)錯誤
不能,因?yàn)榇朔椒ǐ@得的目的基因中含有內(nèi)含子,大腸桿菌無法正常識別內(nèi)含子而對內(nèi)含子部分轉(zhuǎn)錄的mRNA進(jìn)行翻譯,導(dǎo)致合成的蛋白質(zhì)出現(xiàn)錯誤
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