人類胰島素基因位于第11號染色體上,長度8416bp,包含3個外顯子和2個內含子,人類胰島素的氨基酸序列已知?;卮鹣嚓P問題:

(1)如圖是利用PCR技術獲取人胰島素基因的方法,除了此方法外,還可以利用的方法是從基因文庫獲取或人工合成從基因文庫獲取或人工合成。
(2)利用PCR技術獲取人胰島素基因,在緩沖液中除了要添加模板和引物外,還需要添加的物質有四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)。
(3)經過33輪循環(huán)可以得到所需的目的基因,一個DNA分子經過5輪循環(huán),需要引物A3131個,從PCR的過程和DNA分子的特點,試著寫出設計引物需要注意的問題引物自身不能有互補序列 引物之間不能有互補序列、引物長度適當、引物能與目的基因兩側特異性結合、避免與擴增DNA內有過多互補的序列引物自身不能有互補序列 引物之間不能有互補序列、引物長度適當、引物能與目的基因兩側特異性結合、避免與擴增DNA內有過多互補的序列(答出2點即可)。
(4)利用SDS-凝膠電泳分離不同DNA分子,遷移速度取決于DNA分子的大小DNA分子的大小。
(5)利用圖示方法獲取的目的基因,直接構建基因表達載體后導入大腸桿菌,能不能表達出人胰島素,判斷并說明理由不能,因為此方法獲得的目的基因中含有內含子,大腸桿菌無法正常識別內含子而對內含子部分轉錄的mRNA進行翻譯,導致合成的蛋白質出現(xiàn)錯誤不能,因為此方法獲得的目的基因中含有內含子,大腸桿菌無法正常識別內含子而對內含子部分轉錄的mRNA進行翻譯,導致合成的蛋白質出現(xiàn)錯誤。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】從基因文庫獲取或人工合成;四種脫氧核苷酸和熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶);3;31;引物自身不能有互補序列 引物之間不能有互補序列、引物長度適當、引物能與目的基因兩側特異性結合、避免與擴增DNA內有過多互補的序列;DNA分子的大?。徊荒?,因為此方法獲得的目的基因中含有內含子,大腸桿菌無法正常識別內含子而對內含子部分轉錄的mRNA進行翻譯,導致合成的蛋白質出現(xiàn)錯誤
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/5/23 20:38:36組卷:29引用:4難度:0.6
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