干擾素是一種重要的免疫活性物質(zhì)，具有抗病毒、調(diào)節(jié)免疫等功效。如圖是研究人員利用基因工程生產(chǎn)人干擾素的三種方法。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

第一種方法是利用基因工程通過(guò)培育山羊乳腺生物反應(yīng)器大量生產(chǎn)干擾素。
（1）基因工程獲取的人干擾素基因一般來(lái)自cDNA文庫(kù)，獲取的目的基因可通過(guò)

PCR技術(shù)

PCR技術(shù)

大量擴(kuò)增，擴(kuò)增需要的條件有模板DNA、dNTP、引物、

耐高溫的DNA聚合酶

耐高溫的DNA聚合酶

、高溫等。
（2）重組人干擾素基因表達(dá)載體由山羊酪蛋白基因啟動(dòng)子，人干擾素基因，標(biāo)記基因和終止等組成，其中

山羊酪蛋白基因啟動(dòng)子

山羊酪蛋白基因啟動(dòng)子

決定了人干擾素基因只能在山羊乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)。一般需要將重組人干擾素基因表達(dá)載體導(dǎo)入

雌性

雌性

（填“雄性”或“雌性”）胚胎細(xì)胞中。在轉(zhuǎn)基因羊發(fā)育成熟時(shí)，為了檢測(cè)羊奶中是否有人干擾素，可用

抗原—抗體雜交技術(shù)

抗原—抗體雜交技術(shù)

方法。
第二種方法是利用蛋白質(zhì)工程來(lái)合成干擾素。
（3）如果我們采用蛋白質(zhì)工程來(lái)合成人干擾素，可以通過(guò)

改造或合成基因

改造或合成基因

，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造新的蛋白質(zhì)，以滿足人類(lèi)生產(chǎn)和生活的需要。
第三種方法是利用基因工程通過(guò)大腸桿菌來(lái)生產(chǎn)干擾素。
（4）具體做法是將產(chǎn)生干擾素的人白細(xì)胞的mRNA分離，反轉(zhuǎn)錄得到干擾素基因。將含有四環(huán)素、氨芐青霉素抗性基因的質(zhì)粒PBR322和干擾素基因進(jìn)行雙酶切，用DNA連接酶連接。將重組載體DNA分子在一定條件下導(dǎo)入大腸桿菌，在培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng)，檢測(cè)干擾素的表達(dá)量，選出高效表達(dá)的工程菌。據(jù)圖分析，構(gòu)建重組載體DNA分子時(shí)，可以選用

酶B與酶C

酶B與酶C

兩種限制酶對(duì)質(zhì)粒pBR322和干擾素基因進(jìn)行雙酶切，目的是既能保證目的基因和質(zhì)粒正向連接，又能防止

目的基因或載體的自身連接

目的基因或載體的自身連接

（答1點(diǎn)）。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中，然后將細(xì)菌涂布到含

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，就可得到含質(zhì)粒PBR322或重組質(zhì)粒的細(xì)菌單菌落。