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同源重組技術(shù)結(jié)合tetr-sacB雙重選擇系統(tǒng)可對基因進行敲除與回補，研究基因的功能。圖1是科研人員利用該方法對大腸桿菌tacZ基因進行敲除與回補的相關(guān)過程，其中tetr是四環(huán)素抗性基因，sacB基因（2071bp）是蔗糖致死基因，LacZ基因表達產(chǎn)物能將無色化合物X-gal水解成藍色化合物。請回答下列問題：
菁優(yōu)網(wǎng)?
（1）過程①PCR除需要加入Taq酶、dNTP、緩沖液、Mg2+外，還需加入
引物（或P1、P2）和模板（或質(zhì)粒1）
引物（或P1、P2）和模板（或質(zhì)粒1）
，所加dNTP的作用有
既作為原料又提供能量
既作為原料又提供能量
。
（2）為保證sacB基因和質(zhì)粒2定向連接，設(shè)計引物P1、P2時，需在引物5'端添加限制酶
BamHⅠ、EcoRⅠ
BamHⅠ、EcoRⅠ
的識別序列；過程②需要限制酶和
DNA連接
DNA連接
酶。
（3）過程③中，需先用Ca2+處理大腸桿菌，使其成為
感受態(tài)
感受態(tài)
細胞。篩選導(dǎo)入質(zhì)粒3的大腸桿菌時需在培養(yǎng)基中添加
四環(huán)素
四環(huán)素
。
（4）圖2是對質(zhì)粒3轉(zhuǎn)化菌落進行PCR驗證時的產(chǎn)物電泳結(jié)果，泳道4、5、7對應(yīng)的菌株可能轉(zhuǎn)化成功，判斷的理由是
4、5、7的電泳結(jié)果接近（或大于）2071bp
4、5、7的電泳結(jié)果接近（或大于）2071bp
。過程⑤PCR中設(shè)計引物P3、P4時，需在引物5′端分別添加
LacZ
LacZ
基因兩端的同源序列。
（5）過程⑦中，在含有四環(huán)素和
X-gal
X-gal
的培養(yǎng)基中出現(xiàn)了白色菌落，即為篩選出的敲除LacZ基因菌株。過程⑧通過同源重組技術(shù)結(jié)合tetr-sacB雙重選擇系統(tǒng)可對LacZ基因進行回補，篩選LacZ基因回補菌株時應(yīng)在培養(yǎng)基中添加
蔗糖和X-gal
蔗糖和X-gal
。

【答案】引物（或P1、P2）和模板（或質(zhì)粒1）；既作為原料又提供能量；BamHⅠ、EcoRⅠ；DNA連接；感受態(tài)；四環(huán)素；4、5、7的電泳結(jié)果接近（或大于）2071bp；LacZ；X-gal；蔗糖和X-gal
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/28 8:0:9組卷：10引用：4難度：0.7
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  • 1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 2．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細胞
    ⑤目的基因和運載體重組構(gòu)建表達載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當復(fù)制模板
    菁優(yōu)網(wǎng)
    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應(yīng)中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5

  • 3．用限制酶EcoRⅤ單獨切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
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