隨著全球轉(zhuǎn)基因作物大規(guī)模種植和全球一體化下頻繁的貿(mào)易流通,轉(zhuǎn)基因監(jiān)管的任務(wù)將越來越重。為了還給消費者知情權(quán)和選擇權(quán),多個國家和地區(qū)對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品實行標(biāo)識管理制度,這些法規(guī)實施的前提就是要建立穩(wěn)定、準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)。PCR轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)被多國檢測工作者使用,該技術(shù)通常包括核酸提取、核酸擴(kuò)增、擴(kuò)增產(chǎn)物檢測3個步驟。某研究小組設(shè)計并完成了“轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆定性PCR檢測”實驗,請參與實驗設(shè)計并回答相關(guān)問題(草甘膦為常用除草劑;轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆的外源基因構(gòu)建圖如圖1所示):
(1)提取DNA:取待測大豆組織裂解破碎,進(jìn)行DNA提取和純化,得到待測大豆基因組DNA。該過程的常用的試劑有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是 溶解DNA溶解DNA,提取到的DNA可以用 二苯胺二苯胺試劑鑒定。
(2)DNA擴(kuò)增:
①在確定擴(kuò)增對象后,從 序列數(shù)據(jù)庫序列數(shù)據(jù)庫中獲得待擴(kuò)增基因序列,以此為依據(jù)可設(shè)計引物。該小組擬定的引物設(shè)計如表所示,其引物設(shè)計有一個是不科學(xué)的,請指出并說明原因 CaMV35S的引物設(shè)計不科學(xué),原因是引物太短、特異性弱,并且兩個引物之間會互補(bǔ)結(jié)合CaMV35S的引物設(shè)計不科學(xué),原因是引物太短、特異性弱,并且兩個引物之間會互補(bǔ)結(jié)合。
基因 | 引物序列 | 產(chǎn)物片段大小 | 基因來源 |
Lectin | F-5'GCC CTC TAC TCC ACC CCC ATC C-3' R-5'GCC CAT CTG CAA GCC TTT TTG TG-3' |
118 | 內(nèi)源基因 |
CaMV35S | F-5'GGG ATT-3' R-5'AAT CCC-3' |
195 | 外源基因 |
NOS | F-5'GAA TCC TGT TGC CGG TCT TG-3' R-5'TTA TCC TAG TTT GCG CGC TA-3' |
180 | 外源基因 |
CP4-EPSPS | F-5'CTT CTG TGC TGT AGC CAC TGA TGC-3 R-5'CCA CTA TCC TTC GCA AGA CCC TTC-3 |
320 | 外源基因 |
②PCR擴(kuò)增:在4個反應(yīng)體系中分別加入
待測大豆基因組DNA
待測大豆基因組DNA
(模板)、相應(yīng)引物、Taq
Taq
酶、4種脫氧核苷酸
4種脫氧核苷酸
等,并將PCR儀的溫度設(shè)定為:變性94℃30s、復(fù)性58℃30s、延伸72℃40s,循環(huán)30次。“延伸”的溫度設(shè)定為72℃,是因為該溫度下 Taq酶活性較高
Taq酶活性較高
。在設(shè)定的PCR體系下可以特異性擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段,主要是因為 引物與模板DNA的結(jié)合
引物與模板DNA的結(jié)合
具有特異性。(3)擴(kuò)增產(chǎn)物檢測:可采用
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳
的方法檢測。部分實驗結(jié)果如圖2、3所示。據(jù)圖2初步判斷,該大豆為 非轉(zhuǎn)基因
非轉(zhuǎn)基因
(填“轉(zhuǎn)基因”或“非轉(zhuǎn)基因”)大豆。據(jù)圖2、圖3分析,其實驗結(jié)果是 不可信的
不可信的
(填“可信的”或“不可信的”)。【答案】溶解DNA;二苯胺;序列數(shù)據(jù)庫;CaMV35S的引物設(shè)計不科學(xué),原因是引物太短、特異性弱,并且兩個引物之間會互補(bǔ)結(jié)合;待測大豆基因組DNA;Taq;4種脫氧核苷酸;Taq酶活性較高;引物與模板DNA的結(jié)合;瓊脂糖凝膠電泳;非轉(zhuǎn)基因;不可信的
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:46引用:1難度:0.5
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