人類γ基因啟動子上游的調控序列中含有BCL11A蛋白結合位點，該位點結合BCL11A蛋白后，γ基因的表達被抑制。通過改變該結合位點的序列，解除對γ基因表達的抑制，可對某種地中海貧血癥進行基因治療?？蒲腥藛T擴增了γ基因上游不同長度的片段，將這些片段分別插入表達載體中進行轉化和熒光檢測，以確定BCL11A蛋白結合位點的具體位置。相關信息如圖所示。
（1）為將擴增后的產物定向插入載體指導熒光蛋白基因表達，需在引物末端添加限制酶識別序列。據圖可知，在F1～F7末端添加的序列所對應的限制酶是 SalⅠSalⅠ，在R末端添加的序列所對應的限制酶是 EcoRⅠEcoRⅠ。本實驗中，從產物擴增到載體構建完成的整個過程共需要 66種酶。
（2）將構建的載體導入除去BCL11A基因的受體細胞，成功轉化后，含F(xiàn)1～F6與R擴增產物的載體表達熒光蛋白，受體細胞有熒光，含F(xiàn)7與R擴增產物的受體細胞無熒光。含F(xiàn)7與R擴增產物的受體細胞無熒光的原因是 F7與R擴增產物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達F7與R擴增產物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達。
（3）向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，含F(xiàn)1～F4與R擴增產物的受體細胞不再有熒光，而含F(xiàn)5～F6與R擴增產物的受體細胞仍有熒光。若γ基因上游調控序列上與引物序列所對應的位置不含有BCL11A蛋白的結合位點序列，據此結果可推測，BCL11A蛋白結合位點位于 引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上，理由是 根據有無熒光情況判斷，F(xiàn)1～F4與R擴增產物上均有結合位點，因此結合位點位于F4所對應調控序列的下游（右側）；F5～F6與R擴增產物上均無結合位點，可知結合位點位于F5所對應調控序列的上游（左側），所以結合位點位于引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上根據有無熒光情況判斷，F(xiàn)1～F4與R擴增產物上均有結合位點，因此結合位點位于F4所對應調控序列的下游（右側）；F5～F6與R擴增產物上均無結合位點，可知結合位點位于F5所對應調控序列的上游（左側），所以結合位點位于引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】SalⅠ；EcoRⅠ；6；F7與R擴增產物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達；引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上；根據有無熒光情況判斷，F(xiàn)1～F4與R擴增產物上均有結合位點，因此結合位點位于F4所對應調控序列的下游（右側）；F5～F6與R擴增產物上均無結合位點，可知結合位點位于F5所對應調控序列的上游（左側），所以結合位點位于引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網所有，未經書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：438引用：2難度：0.6
相似題
-
1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
相關試卷