CBF1基因過(guò)量表達(dá)能提高擬南芥植株的抗寒性。苜蓿是飼草料產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要草種，低溫等逆境脅迫會(huì)導(dǎo)致苜蓿減產(chǎn)。科研人員從擬南芥植株中克隆得到冷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子（At-CBF1）基因，通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗寒紫花苜蓿，以使苜蓿安全越冬和提高產(chǎn)量。回答下列問(wèn)題：
（1）在擴(kuò)增At-CBF1基因的過(guò)程中，先根據(jù) At-CBF1基因的核苷酸序列At-CBF1基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增時(shí)，反應(yīng)體系的初始溫度設(shè)置在90～95℃的目的是 使目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈使目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈。PCR過(guò)程中需要使用 Taq（或耐高溫的DNA聚合聚合）Taq（或耐高溫的DNA聚合聚合）酶。
（2）回收PCR產(chǎn)物并酶切后用 DNA連接酶DNA連接酶將At-CBF1 基因連接到T質(zhì)粒上，以得到T-CBF1重組質(zhì)粒。構(gòu)建T-CBF1重組質(zhì)粒時(shí)，同時(shí)使用BamHⅠ和SacⅠ進(jìn)行雙酶切的目的是 產(chǎn)生不同的黏性末端，使目的基因和質(zhì)粒定向連接產(chǎn)生不同的黏性末端，使目的基因和質(zhì)粒定向連接。
（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，培育后篩選轉(zhuǎn)化陽(yáng)性的植株。若采用分子雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿植株目的基因的轉(zhuǎn)錄水平，則需要將 放射性標(biāo)記的 At-CBF1基因放射性標(biāo)記的 At-CBF1基因片段制成探針。
（4）為進(jìn)一步研究轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的抗寒機(jī)制，還需要進(jìn)一步開(kāi)展研究。請(qǐng)完成如圖研究技術(shù)路線圖。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】At-CBF1基因的核苷酸序列；使目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈；Taq（或耐高溫的DNA聚合聚合）；DNA連接酶；產(chǎn)生不同的黏性末端，使目的基因和質(zhì)粒定向連接；放射性標(biāo)記的 At-CBF1基因
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：2引用：1難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問(wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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