試卷征集
加入會(huì)員
操作視頻
某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過(guò)程中,需要表達(dá)N蛋白胞外段,制備相應(yīng)的單克隆抗體,增加其對(duì)N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。N蛋白胞外段單克隆抗體制備流程如圖1:
菁優(yōu)網(wǎng)
(1)用N蛋白胞外段作為抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫后,取小鼠腺組織用
機(jī)械
機(jī)械
方法或
胰蛋白
胰蛋白
酶處理,制成細(xì)胞懸液,置于含有
95%空氣和5%的CO2
95%空氣和5%的CO2
氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),離心收集小鼠的B淋巴細(xì)胞,與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。
(2)用選擇性培養(yǎng)基對(duì)融合后的細(xì)胞進(jìn)行篩選,獲得雜交瘤細(xì)胞,將其接種到96孔板,進(jìn)行
克隆化
克隆化
培養(yǎng)。用
抗原一抗體雜交
抗原一抗體雜交
技術(shù)檢測(cè)每孔中的抗體,篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體,又能大量增殖的單克隆雜交瘤細(xì)胞株,經(jīng)體外擴(kuò)大培養(yǎng),收集
細(xì)胞培養(yǎng)液
細(xì)胞培養(yǎng)液
,提取單克隆抗體。
(3)利用上述流程制備的N蛋白胞外段抗體能準(zhǔn)確識(shí)別
抗原
抗原
的細(xì)微差異,與之發(fā)生特異性結(jié)合,并可
大量制備
大量制備
,因此被廣泛用作診斷試劑。
(4)利用小鼠制備的抗體是鼠源抗體,鼠源抗體具有外源性,會(huì)被人體免疫系統(tǒng)當(dāng)作抗原而清除(稱(chēng)為人抗鼠抗體反應(yīng)即HAMA反應(yīng))??贵w結(jié)構(gòu)示意圖如圖2,引起HAMA反應(yīng)的主要是“C區(qū)”,通過(guò)制備人鼠嵌合抗體可以解決HAMA反應(yīng)?,F(xiàn)利用重組DNA技術(shù)可以制備人鼠嵌合抗體,請(qǐng)寫(xiě)出簡(jiǎn)要制備思路:
將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的基因中,并構(gòu)建基因表達(dá)載體,利用顯微注射技術(shù)將表達(dá)載體導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,表達(dá)出嵌合抗體
將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的基因中,并構(gòu)建基因表達(dá)載體,利用顯微注射技術(shù)將表達(dá)載體導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,表達(dá)出嵌合抗體
。
(5)為了進(jìn)一步減少免疫排斥反應(yīng),科學(xué)家利用噬菌體展示庫(kù)技術(shù)生產(chǎn)出全人源化單抗(單抗成分全部由人的基因編碼)。具體操作如下,用PCR技術(shù)從生物體內(nèi)擴(kuò)增出整套編碼人抗體的基因序列,克隆到噬菌體載體上,并以融合蛋白的形式表達(dá)到噬菌體表面,從而可以方便地對(duì)抗體進(jìn)行篩選、擴(kuò)增。但是利用這種方法制備的抗體結(jié)構(gòu)準(zhǔn)確程度下降,原因是
抗體是在原核細(xì)胞內(nèi)表達(dá),原核生物不能對(duì)真核生物的復(fù)雜蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確加工
抗體是在原核細(xì)胞內(nèi)表達(dá),原核生物不能對(duì)真核生物的復(fù)雜蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確加工
【答案】機(jī)械;胰蛋白;95%空氣和5%的CO2;克隆化;抗原一抗體雜交;細(xì)胞培養(yǎng)液;抗原;大量制備;將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的基因中,并構(gòu)建基因表達(dá)載體,利用顯微注射技術(shù)將表達(dá)載體導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,表達(dá)出嵌合抗體;抗體是在原核細(xì)胞內(nèi)表達(dá),原核生物不能對(duì)真核生物的復(fù)雜蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確加工
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書(shū)面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:24引用:3難度:0.7
相似題
  • 1.2018年1月25日?qǐng)?bào)道,兩只克隆獼猴“中中”和“華華”在中國(guó)誕生,突破了現(xiàn)有技術(shù)無(wú)法克隆靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物的世界難題,將為阿爾茨海默癥、自閉癥等腦疾病帶來(lái)前所未有的光明前景,圖1為過(guò)程流程圖,請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題:
    菁優(yōu)網(wǎng)
    (1)欲獲得單個(gè)雌獼猴體細(xì)胞,可用
     
    酶處理動(dòng)物組織塊。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般分為
     
    和傳代培養(yǎng)兩個(gè)階段過(guò)程。在前一階段,貼壁的細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)
     
    現(xiàn)象,所以要進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
    (2)①表示去除細(xì)胞核,該過(guò)程一般要在卵母細(xì)胞培養(yǎng)至
     
    時(shí)期再進(jìn)行,目前使用的去核方法是
     
    。②表示
     

    (3)A細(xì)胞的獲得過(guò)程屬于
     
    (有性/無(wú)性)生殖,在培養(yǎng)早期胚胎時(shí),培養(yǎng)液中通常要添加
     
    等一些天然成分。
    (4)根據(jù)圖2回答相關(guān)問(wèn)題:
    若圖表示動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程,過(guò)程①區(qū)別于植物細(xì)胞常用的誘導(dǎo)劑是
     

    若圖表示制備單克隆抗體的部分過(guò)程,甲細(xì)胞為小鼠的骨髓瘤細(xì)胞,則乙細(xì)胞為
     
    。
    發(fā)布:2024/9/11 6:0:10組卷:0引用:2難度:0.6
  • 2.回答下列(一)、(二)小題:
    (一)下面是某生物興趣小組同學(xué)配制的培養(yǎng)基,將馬鈴薯去皮切塊,加水煮沸一定時(shí)間,過(guò)濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂,用水定容后滅菌,得到M培養(yǎng)基?;卮鹣铝袉?wèn)題:
    (1)在馬鈴薯浸出液中含有微生物生長(zhǎng)所需的水、碳源、
     
    、生長(zhǎng)因子等,向馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖的原因是
     

    (2)若用M培養(yǎng)基分離酵母菌或霉菌,需要在培養(yǎng)基中加入青霉素,該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基,加入青霉素能分離酵母菌和霉菌的機(jī)理是
     
    。
    (3)若用M培養(yǎng)基分離土壤中能分解纖維素的微生物,需要用
     
    替代M培養(yǎng)基中的碳源,同時(shí)要加入剛果紅染料,已知?jiǎng)偣t可以與纖維素形成紅色復(fù)合物,但并不和纖維素水解后的生成物發(fā)生這種反應(yīng)。接種土壤浸出液后,經(jīng)培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以這些細(xì)菌為中心的透明圈,產(chǎn)生透明圈的原因是
     
    。
    (4)若用M培養(yǎng)基生產(chǎn)谷氨酸,需要調(diào)整培養(yǎng)基中的碳氮比,研究發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)基碳氮比為4:1時(shí),菌體大量繁殖,谷氨酸積累
     
    ;當(dāng)培養(yǎng)基碳氮比為3:1時(shí),菌體繁殖受到抑制,谷氨酸產(chǎn)量則
     
    。
    (二)單克隆抗體被廣泛用作診斷試劑,在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮重要的作用。如圖是單克隆抗體制備示意圖,結(jié)合相關(guān)知識(shí)回答下列問(wèn)題:
    菁優(yōu)網(wǎng)
    (5)過(guò)程①加的促融劑是
     
    ,只考慮兩兩融合則①有
     
    種融合形式。
    (6)在HAT培養(yǎng)基中能生存的細(xì)胞是
     
    ,該培養(yǎng)基為
     
    。
    (7)過(guò)程③用96孔板培養(yǎng)和篩選雜交瘤細(xì)胞,具體方法是
     
    ,篩選的原理是
     
    ,篩選的結(jié)果是既能產(chǎn)生特異性抗體,又能無(wú)限繁殖的雜交瘤細(xì)胞。
    (8)單克隆抗體的最大優(yōu)點(diǎn)是
     
    (答出一點(diǎn)即可)。若制備能診斷新冠病毒的單克隆抗體診斷試劑盒,則注射抗原A為
     
    。
    發(fā)布:2024/9/12 4:0:8組卷:4引用:2難度:0.6
  • 3.常見(jiàn)的探針有核酸探針和蛋白質(zhì)探針。兩種探針結(jié)構(gòu)和功能均不相同,故而應(yīng)用在不同的檢測(cè)中。而兩種探針的制備過(guò)程中所應(yīng)用的技術(shù)也不相同。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。
    Ⅰ、蛋白質(zhì)探針的制備。
    (1)蛋白質(zhì)探針常用
     
    技術(shù)來(lái)制備。該技術(shù)的基本流程是將
     
    注射給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,獲取的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后,用HAT培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)對(duì)象。該篩選過(guò)程得到的雜交瘤細(xì)胞是產(chǎn)生
     
    的雜交瘤細(xì)胞,接下來(lái)要經(jīng)過(guò)
     
    檢測(cè)來(lái)獲得產(chǎn)生特定蛋白的雜交瘤細(xì)胞。最終將純化得到的特定蛋白結(jié)合上熒光或放射性標(biāo)記,即為蛋白質(zhì)探針。
    (2)上述HAT培養(yǎng)基是
     
    (填“液體”或“固體”)培養(yǎng)基。融合成雜交瘤細(xì)胞后再檢測(cè)尋找產(chǎn)生特定目標(biāo)蛋白的雜交瘤細(xì)胞,而不直接在脾細(xì)胞中尋找產(chǎn)生特定蛋白的B淋巴細(xì)胞的原因是
     
    。
    Ⅱ、不對(duì)稱(chēng)PCR是利用不等量的一對(duì)引物來(lái)產(chǎn)生大量單鏈DNA(ssDNA)的方法。該方法制備的ssDNA結(jié)合上熒光或放射性標(biāo)記,即為核酸探針。
    菁優(yōu)網(wǎng)
    (3)不對(duì)稱(chēng)PCR中加入的一對(duì)引物中含量較少的被稱(chēng)為限制性引物,含量較多的被稱(chēng)為非限制性引物。兩者的比例通常為1:100。PCR反應(yīng)的最初的若干次循環(huán)中,其擴(kuò)增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA(dsDNA),但當(dāng)限制性引物消耗完后,就會(huì)產(chǎn)生大量的ssDNA。據(jù)下圖可知,最后大量獲得的ssDNA是圖中的
     
    (填“甲”或“乙”)鏈。
    (4)若反應(yīng)最初有a個(gè)模板DNA分子,最初的6次循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)生dsDNA,后10個(gè)循環(huán)均只擴(kuò)增ssDNA,則需要限制性引物
     
    個(gè)。請(qǐng)繪制這16個(gè)循環(huán)中ssDNA的分子數(shù)量隨循環(huán)次數(shù)的變化圖2。(說(shuō)明:縱軸的刻度請(qǐng)自行標(biāo)注。)
    發(fā)布:2024/9/12 1:0:10組卷:1引用:1難度:0.5
小程序二維碼
把好題分享給你的好友吧~~
APP開(kāi)發(fā)者:深圳市菁優(yōu)智慧教育股份有限公司 | 應(yīng)用名稱(chēng):菁優(yōu)網(wǎng) | 應(yīng)用版本:4.8.2  |  隱私協(xié)議      第三方SDK     用戶(hù)服務(wù)條款廣播電視節(jié)目制作經(jīng)營(yíng)許可證出版物經(jīng)營(yíng)許可證網(wǎng)站地圖本網(wǎng)部分資源來(lái)源于會(huì)員上傳,除本網(wǎng)組織的資源外,版權(quán)歸原作者所有,如有侵犯版權(quán),請(qǐng)立刻和本網(wǎng)聯(lián)系并提供證據(jù),本網(wǎng)將在三個(gè)工作日內(nèi)改正