某病毒對動物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴(yán)重。我國學(xué)者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來制備單克隆抗體，以期快速檢測該病毒，其主要技術(shù)路線如圖1所示。

回答下列問題：
（1）與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合前，已免疫的脾細(xì)胞（含漿細(xì)胞）

不需要

不需要

（填“需要”或“不需要”）通過原代培養(yǎng)擴大細(xì)胞數(shù)量；添加脂溶性物質(zhì)PEG可促進(jìn)細(xì)胞融合，該過程中PEG對細(xì)胞膜的作用是

促進(jìn)細(xì)胞膜的流動性

促進(jìn)細(xì)胞膜的流動性

。
（2）在雜交瘤細(xì)胞篩選過程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基），該培養(yǎng)基對

單個骨髓瘤細(xì)胞

單個骨髓瘤細(xì)胞

和

骨髓瘤—骨髓瘤細(xì)胞

骨髓瘤—骨髓瘤細(xì)胞

生長具有抑制作用。
（3）單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進(jìn)行雜交，其目的是

若某種抗體可以與病毒外殼蛋白結(jié)合，則產(chǎn)生該抗體的細(xì)胞為所需的雜交瘤細(xì)胞，從而把所需的雜交瘤細(xì)胞篩選出來

若某種抗體可以與病毒外殼蛋白結(jié)合，則產(chǎn)生該抗體的細(xì)胞為所需的雜交瘤細(xì)胞，從而把所需的雜交瘤細(xì)胞篩選出來

。
（4）構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用DNA連接酶。圖2中屬于DNA連接酶底物的是

④

④

。