腸道病毒EV71是RNA病毒，其表面蛋白為VP1～VP4，分別由V1～V4基因控制。為研究VP1～VP4的抗原性，從中篩選出EV71的疫苗抗原，研究人員利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)了上述4種蛋白質(zhì)。如圖是制備V1基因表達(dá)載體的過程示意圖，請回答下列問題：
gus：控制合成的酶使β-葡萄糖苷酸水解為藍(lán)色物質(zhì)
Kan：卡那霉素抗性基因
（1）以RNA為模板，通過4組RT-PCR可分別獲取V1～V4基因（DNA）。RT-PCR所需要的酶有 逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶，該過程中子鏈延伸時所需的能量較為特殊，一般來自 dNTPdNTP。
（2）為方便目的基因與質(zhì)粒的連接，通常將限制酶的切點(diǎn)設(shè)計在引物上。引物一般為單鏈DNA，新合成子鏈的延伸方向為5′→3′。PCR獲取V1基因時，10引物中限制酶切點(diǎn)的堿基序列應(yīng)設(shè)計為上游引物3′…GGATCCGGATCC…5′，下游引物3′…CTCGAGCTCGAG…5′。
（3）用相關(guān)限制酶處理質(zhì)粒和V1基因后，再與 DNA連接DNA連接酶混合，加入大腸桿菌溫育。一段時間后，將菌液涂布在含有 β—葡萄糖苷酸β—葡萄糖苷酸和 卡那霉素卡那霉素的平板上，經(jīng)培養(yǎng)，在平板上長出白色和藍(lán)色兩種菌落，其中 白色白色菌落含有V1基因表達(dá)載體，判斷依據(jù)是 構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養(yǎng)基上，含重組V1基因質(zhì)粒的大腸桿菌不顯藍(lán)色構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養(yǎng)基上，含重組V1基因質(zhì)粒的大腸桿菌不顯藍(lán)色。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶；dNTP；GGATCC；CTCGAG；DNA連接；β—葡萄糖苷酸；卡那霉素；白色；構(gòu)建目的基因表達(dá)載體時切除了gus含基因，在含β—葡萄糖苷酸的培養(yǎng)基上，含重組V1基因質(zhì)粒的大腸桿菌不顯藍(lán)色
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：1難度：0.6
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．科學(xué)家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于（填“基因工程”或“蛋白質(zhì)工程”）?？衫枚c(diǎn)突變的DNA構(gòu)建基因表達(dá)載體，常用將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞，還需用到植物細(xì)胞工程中的技術(shù)，才能最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。
（2）PCR過程所依據(jù)的原理是。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，若將一個目的基因復(fù)制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為。科研人員通過實驗研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉(zhuǎn)基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長激素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞核中，經(jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞是因為這種細(xì)胞的全能性最容易表達(dá)
B．采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測外源基因在小鼠細(xì)胞內(nèi)是否成功表達(dá)
C．人的生長激素基因能在小鼠細(xì)胞表達(dá)，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞進(jìn)行核移植（克?。?，可以獲得多個具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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