多不飽和脂肪酸（PUFAs）是人體必需脂肪酸，豬肉是我國最主要的肉類消費品，提高其PUFAs含量對居民健康具有重要意義。為解決豬肉中PUFAs含量不足的問題，研究者從線蟲中獲得控制PUFAs合成的必需酶基因fat1，培育轉(zhuǎn)fat1基因豬，操作過程如圖1。
（1）利用PCR技術(shù)擴增fat1基因時，應(yīng)在兩種引物的一端分別加上限制酶 EcoRⅠEcoRⅠ和 BamHⅠBamHⅠ識別與切割的序列。為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，構(gòu)建表達載體一般選用兩種限制酶，選擇的原則是 B、DB、D。
A.目的基因編碼蛋白質(zhì)的序列中有兩種限制酶切割位點
B.表達載體內(nèi)，每種限制酶只有一個切割位點
C.酶切后，目的基因兩端的黏性末端序列相同
D.酶切后，載體形成的兩個黏性末端序列不同
（2）圖1中的連接產(chǎn)物需先導入大腸菌中的原因是 連接產(chǎn)物為混合物，需先導入大腸菌篩選正確的重組表達載體，再導入豬成纖維細胞，以提高轉(zhuǎn)基因的成功率連接產(chǎn)物為混合物，需先導入大腸菌篩選正確的重組表達載體，再導入豬成纖維細胞，以提高轉(zhuǎn)基因的成功率；所構(gòu)建的重組基因表達載體中未標注出的必需元件還有 復制原點和標記基因復制原點和標記基因。
（3）將重組表達載體轉(zhuǎn)染豬成纖維細胞，另設(shè)一組空白對照。48小時后于熒光顯微鏡下觀察到 轉(zhuǎn)染重組表達載體的豬成纖維細胞有綠色熒光，而空白對照組無綠色熒光轉(zhuǎn)染重組表達載體的豬成纖維細胞有綠色熒光，而空白對照組無綠色熒光，說明轉(zhuǎn)染成功。然后以轉(zhuǎn)基因細胞為核供體構(gòu)建克隆胚胎，最終獲得轉(zhuǎn)fat1基因豬。
（4）研究者提取轉(zhuǎn)基因豬的基因組DNA，利用限制酶DraⅢ將其完全酶切并電泳分離。然后用探針通過 分子雜交分子雜交的方法，檢測fat1基因是否成功整合在豬基因組DNA中，酶切方式及檢測結(jié)果如圖2。
①轉(zhuǎn)基因豬1、2、3中分別被轉(zhuǎn)入了 1、2、11、2、1個fat1基因。
②請解釋圖2檢測結(jié)果中4條雜交帶位置不同的原因：4個fat1基因插入在基因組中的位點不同，酶切得到的含fat1基因的DNA片段大小不同，電泳分離后，其分布在凝膠的不同位置4個fat1基因插入在基因組中的位點不同，酶切得到的含fat1基因的DNA片段大小不同，電泳分離后，其分布在凝膠的不同位置。
③該實驗 不能不能（填“能”或“不能”）說明成功培育轉(zhuǎn)基因豬，理由是 沒有檢測fat1基因是否成功表達；沒有在個體生物學水平鑒定轉(zhuǎn)基因豬的PUFAs沒有檢測fat1基因是否成功表達；沒有在個體生物學水平鑒定轉(zhuǎn)基因豬的PUFAs。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】EcoRⅠ；BamHⅠ；B、D；連接產(chǎn)物為混合物，需先導入大腸菌篩選正確的重組表達載體，再導入豬成纖維細胞，以提高轉(zhuǎn)基因的成功率；復制原點和標記基因；轉(zhuǎn)染重組表達載體的豬成纖維細胞有綠色熒光，而空白對照組無綠色熒光；分子雜交；1、2、1；4個fat1基因插入在基因組中的位點不同，酶切得到的含fat1基因的DNA片段大小不同，電泳分離后，其分布在凝膠的不同位置；不能；沒有檢測fat1基因是否成功表達；沒有在個體生物學水平鑒定轉(zhuǎn)基因豬的PUFAs
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：34引用：2難度：0.6
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2．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
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