甘藍(lán)型油菜中，抑制PEP基因的表達(dá)可提高油菜籽的含油量。通過基因工程將PEP基因反向連接在啟動(dòng)子后，構(gòu)建轉(zhuǎn)反義PEP基因油菜是提高油菜籽含油量的常用技術(shù)路徑。請(qǐng)回答下列問題：
（1）為將PEP基因反向連接在啟動(dòng)子后，構(gòu)建反義PEP基因，需要將限制酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)在引物上，PEP基因的上游引物和下游引物中應(yīng)分別引入 ScaⅠ、HamHⅠScaⅠ、HamHⅠ酶切位點(diǎn)。
（2）用激光照射油菜愈傷組織時(shí)，可在細(xì)胞膜上打出一個(gè)穿孔，轉(zhuǎn)反義PEP基因表達(dá)載體由此小孔進(jìn)入油菜細(xì)胞，幾秒種后小孔封閉，該過程體現(xiàn)了細(xì)胞膜具有 流動(dòng)性流動(dòng)性。目的基因表達(dá)載體進(jìn)入細(xì)胞后，Ti質(zhì)粒上的 T-DNAT-DNA區(qū)段可轉(zhuǎn)移到油菜細(xì)胞的基因組中。
（3）篩選時(shí)，需在油菜愈傷組織培養(yǎng)基中加入 新霉素新霉素進(jìn)行初步選擇。在激光照射下，存活的細(xì)胞一般會(huì)發(fā)出 綠色熒光綠色熒光。為檢測反義PEP基因是否整合到染色體上，研究者通常用檢測細(xì)胞中是否存在ntp基因，而不檢測PEP基因。不直接檢測PEP基因的原因是 油菜細(xì)胞的基因組中本身有PEP基因油菜細(xì)胞的基因組中本身有PEP基因。
（4）已知PEP基因的轉(zhuǎn)錄模板鏈為A鏈，則反義PEP基因的轉(zhuǎn)錄模板為 B鏈B鏈。轉(zhuǎn)反義PEP基因油菜中PEP基因的表達(dá)受阻，原因是 以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對(duì)形成雙鏈，抑制了PEP基因的表達(dá)以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對(duì)形成雙鏈，抑制了PEP基因的表達(dá)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】ScaⅠ、HamHⅠ；流動(dòng)性；T-DNA；新霉素；綠色熒光；油菜細(xì)胞的基因組中本身有PEP基因；B鏈；以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對(duì)形成雙鏈，抑制了PEP基因的表達(dá)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：3難度：0.7
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對(duì)目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號(hào)）。過程②③采用的方法是。
（4）⑤過程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中，這兩種植物激素的比例會(huì)發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
3．如表為5種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)，如圖為某種質(zhì)粒和目的基因，箭頭所指為限制酶酶切位點(diǎn)。現(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中，以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說法正確的是（ ）
限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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