回答與利用生物技術(shù)培養(yǎng)抗蟲棉有關(guān)的問題
（1）獲得目的基因：若用化學(xué)方法合成目的基因，則該方法的前提是目的基因

序列已知/已知序列

序列已知/已知序列

。
（2）導(dǎo)入目的基因：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是選擇

農(nóng)桿菌的Ti（或Ri）質(zhì)粒

農(nóng)桿菌的Ti（或Ri）質(zhì)粒

作為載體，為便于篩選導(dǎo)入成功的細(xì)胞，載體上帶有

標(biāo)記

標(biāo)記

基因。將農(nóng)桿菌與外植體共培養(yǎng)期間，要發(fā)生農(nóng)桿菌的附著，

T-DNA的轉(zhuǎn)移和整合（或轉(zhuǎn)化）

T-DNA的轉(zhuǎn)移和整合（或轉(zhuǎn)化）

，這是為了獲得含目的基因的受體細(xì)胞。影響轉(zhuǎn)化效率的因素有農(nóng)桿菌的數(shù)量、共培養(yǎng)的時(shí)間和溫度等環(huán)境條件，還有

農(nóng)桿菌的種類、受體細(xì)胞的植物種類、受體細(xì)胞的植物基因型、外植體發(fā)育階段

農(nóng)桿菌的種類、受體細(xì)胞的植物種類、受體細(xì)胞的植物基因型、外植體發(fā)育階段

等（至少答出2點(diǎn)）。共培養(yǎng)后，將植物材料轉(zhuǎn)入含植物激素和營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，同時(shí)添加

抗生素

抗生素

以去除附著的農(nóng)桿菌。
（3）檢測導(dǎo)入是否成功。常用

A

A

（A．聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B．同位素標(biāo)記法C．抗原抗體雜交D．光電比色法）快速篩選出含目的基因的受體細(xì)胞?，F(xiàn)有抗蟲基因整合到一條染色體的轉(zhuǎn)化植株，欲獲得純合植株，常采用的方法有

自交、單倍體育種

自交、單倍體育種

（至少答出2種）。