基因工程的相關(guān)技術(shù)可用于病毒檢測(cè),也可用于制備疫苗。利用熒光PCR技術(shù)檢測(cè)是否感染某種RNA病毒時(shí),基本操作流程為:提取病毒的RNA→熒光PCR擴(kuò)增反轉(zhuǎn)錄DNA→熒光檢測(cè)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:
(1)分離病毒的RNA通常在冰浴條件下進(jìn)行,目的是抑制
RNA酶
RNA酶
的活性,防止病毒的RNA降解。熒光PCR反應(yīng)體系中需要加入的酶和原料是反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶和4種脫氧核苷酸
反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶和4種脫氧核苷酸
。為保證反應(yīng)體系只擴(kuò)增病毒特異性核酸序列,應(yīng)先根據(jù)病毒的特異性核酸序列設(shè)計(jì)2種引物
2種引物
。
(2)熒光染料能摻入DNA雙鏈中發(fā)出熒光,在游離狀態(tài)下不發(fā)出熒光。若檢測(cè)到熒光量達(dá)到某個(gè)臨界值,則代表陽(yáng)性,說(shuō)明樣本中含有病毒的RNA
樣本中含有病毒的RNA
。若檢測(cè)出現(xiàn)“假陰性”現(xiàn)象,原因可能是病毒的RNA在提取過(guò)程中發(fā)生降解
病毒的RNA在提取過(guò)程中發(fā)生降解
。
(3)某病毒的E蛋白和P蛋白會(huì)引起機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。構(gòu)建重組活病毒載體疫苗時(shí),獲取某病毒的E基因和P基因
E基因和P基因
插入腺病毒的基因組中。通過(guò)重組腺病毒感染動(dòng)物可使其獲得免疫力,原因是重組腺病毒在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)E蛋白和P蛋白,刺激動(dòng)物產(chǎn)生特異性抗體和記憶細(xì)胞
重組腺病毒在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)E蛋白和P蛋白,刺激動(dòng)物產(chǎn)生特異性抗體和記憶細(xì)胞
。