當(dāng)前位置： 2021年湖北省恩施高中、鄖陽中學(xué)、十堰一中高考生物仿真模擬試卷> 試題詳情

圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tsr為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達(dá)能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列?；卮鹣铝袉栴}。
（1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
斷裂，切割形成的末端有
黏性末端和平末端
黏性末端和平末端
兩種。
（2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進(jìn)行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8。通常用兩種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，而不用單酶切的原因是
防止目的基因的錯(cuò)誤連接（或防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及目的基因與質(zhì)粒的反向連接）
防止目的基因的錯(cuò)誤連接（或防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及目的基因與質(zhì)粒的反向連接）
。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后分別得到長度為5.7kb、6.7kb的DNA片段。由此判斷目的基因的片段長度為
1.4
1.4
kb。
（3）導(dǎo)入目的基因時(shí)，首先用Ca²⁺處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細(xì)胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下可以促進(jìn)鏈霉菌完成
轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化
過程。
（4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如上表所示。若要篩選導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌細(xì)胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在
5
5
μg/mL以上，挑選成功導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是
根據(jù)導(dǎo)入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點(diǎn)，通過觀察菌落的顏色進(jìn)行挑選
根據(jù)導(dǎo)入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點(diǎn)，通過觀察菌落的顏色進(jìn)行挑選
。

固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） 0 1 2 5 10

不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況 +++++ ++++ + - -

注：+表示生長，-表示不生長

【答案】磷酸二酯鍵；黏性末端和平末端；防止目的基因的錯(cuò)誤連接（或防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化及目的基因與質(zhì)粒的反向連接）；1.4；轉(zhuǎn)化；5；根據(jù)導(dǎo)入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點(diǎn)，通過觀察菌落的顏色進(jìn)行挑選

【解答】

【點(diǎn)評】

聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。

當(dāng)前模式為游客模式，立即登錄查看試卷全部內(nèi)容及下載

發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：13引用：1難度：0.7

相似題

1．限制酶a、限制酶b能將某線性DNA分子片段切割，其識別序列和切割位點(diǎn)如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?/h2>

A．限制酶a與限制酶b發(fā)揮作用的化學(xué)鍵完全相同

B．限制酶a與限制酶b切出的黏性末端能相互連接

C．所有限制性核酸內(nèi)切酶識別的序列都由6個(gè)核苷酸組成

D．限制酶將該DNA分子切成2個(gè)片段需消耗2個(gè)水分子

發(fā)布：2024/11/10 15:30:3組卷：21引用：5難度：0.7

解析

2．中國甜柿的自然脫澀與乙醛代謝關(guān)鍵酶基因（PDC）密切相關(guān)，推測澀味程度可能與PDC基因的表達(dá)情況有關(guān)。
（1）啟動(dòng)子位于基因首端，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn)，同時(shí)啟動(dòng)子區(qū)域還存在著許多調(diào)控蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，RNA聚合酶和調(diào)控蛋白共同影響了基因的

。
（2）為篩選PDC基因的調(diào)控蛋白，科研人員進(jìn)行了下列實(shí)驗(yàn)。
①PDC基因的啟動(dòng)子序列未知，為獲得大量該基因啟動(dòng)子所在片段，可利用限制酶將基因組DNA進(jìn)行酶切，然后在

的作用下將已知序列信息的接頭片段連接在PDC基因的上游，根據(jù)

和PDC基因編碼序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR.利用質(zhì)粒A（圖1）構(gòu)建含有PDC基因啟動(dòng)子片段的重組質(zhì)粒并導(dǎo)入代謝缺陷型酵母菌，用不含

的培養(yǎng)基可篩選出成功轉(zhuǎn)化的酵母菌Y1H。

②質(zhì)粒G（圖2）上的AD基因表達(dá)出的AD蛋白與啟動(dòng)子足夠靠近時(shí)，能夠激活后續(xù)基因轉(zhuǎn)錄，因此需獲得待測蛋白與AD蛋白的融合蛋白用于后續(xù)篩選?？蒲腥藛T從中國甜柿中提取RNA，將逆轉(zhuǎn)錄形成的各種cDNA與質(zhì)粒G連接后導(dǎo)入酵母菌，此時(shí)應(yīng)選擇質(zhì)粒G中的位點(diǎn)

（填序號1～5）作為cDNA的插入位點(diǎn)，最終獲得攜帶不同cDNA片段的酵母菌群Y187。
③重組酵母Y187與Y1H能夠進(jìn)行接合生殖，形成的接合子含有兩種酵母菌質(zhì)粒上的所有基因。若接合子能在含有金擔(dān)子素的培養(yǎng)基中生存，則推測待測蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白，請結(jié)合圖示闡述作出該推測的理由。
發(fā)布：2024/11/11 0:0:2組卷：82引用：2難度：0.7
解析

3．PHB2蛋白具有抑制細(xì)胞增殖的作用。為初步探究某動(dòng)物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），大小為0.9kb（1kb=1000堿基對），利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白。請回答下列問題：

相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點(diǎn)（注：箭頭表示切割位點(diǎn)）

名稱識別序列及切割位點(diǎn) 名稱識別序列及切割位點(diǎn)

HindⅢ A^↓AGCTT
TTCGA_↑A EcoRⅠ G^↓AATTC
CTTAA_↑G

PvitⅡ CAG^↓CTG
GTC_↑GAC PstⅠ CTGC^↓AG
GA_↑CGTC

KpnⅠ G^↓GTACC
CCATG_↑G BamHⅠ G^↓GATCC
CCTAG_↑G

（1）為獲取phb2基因，提取該動(dòng)物肝臟組織的總RNA經(jīng)RT-PCR獲得大量的目的基因，該過程使用到的酶有

。
（2）圖1為所用載體圖譜示意圖，圖中限制酶的識別序列及切割位點(diǎn)見表。為使phb2基因（該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列）與載體正確連接，在擴(kuò)增的phb2基因兩端需添加

和

兩種限制酶的識別序列。雙酶切避免了目的基因與載體的

連接，同時(shí)減少目的基因與目的基因、載體與載體的連接，以提高重組質(zhì)粒的比例。經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進(jìn)行連接時(shí)，需使用的酶是

。
（3）轉(zhuǎn)化前需用CaCl₂處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于

態(tài)的生理狀態(tài)，以提高轉(zhuǎn)化效率。
（4）將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，隨機(jī)挑取菌落（分別編號為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用（2）中選用的兩種限制酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離，結(jié)果如圖2，

號菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。
（5）將純化得到的PHB2蛋白以一定濃度添加到人宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)24小時(shí)后，檢測處于細(xì)胞周期（圖3）不同時(shí)期的細(xì)胞數(shù)量，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖4。分析該蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖可能的原因是：將細(xì)胞阻滯在細(xì)胞周期的

（填“G₁”或“S”或“G₂/M”）期。

發(fā)布：2024/11/13 20:30:2組卷：22引用：3難度：0.6

解析

把好題分享給你的好友吧~~

固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL）	0	1	2	5	10
不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況	+++++	++++	+	-	-

名稱	識別序列及切割位點(diǎn)	名稱	識別序列及切割位點(diǎn)
HindⅢ	A^↓AGCTT TTCGA_↑A	EcoRⅠ	G^↓AATTC CTTAA_↑G
PvitⅡ	CAG^↓CTG GTC_↑GAC	PstⅠ	CTGC^↓AG GA_↑CGTC
KpnⅠ	G^↓GTACC CCATG_↑G	BamHⅠ	G^↓GATCC CCTAG_↑G

1．限制酶a、限制酶b能將某線性DNA分子片段切割，其識別序列和切割位點(diǎn)如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>

1．限制酶a、限制酶b能將某線性DNA分子片段切割，其識別序列和切割位點(diǎn)如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?/h2>