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Cre/loxP重組酶系統(tǒng)是在基因或染色體水平上對生物基因進行遺傳改造的一種技術，可以在DNA的特定序列進行定點切割和重新連接。請回答下列問題：
菁優(yōu)網(wǎng)
（1）圖1是利用Cre/loxP酶系統(tǒng)敲除基因的過程。loxP序列具有方向性，由中間的間隔序列和兩側的反向重復序列組成，其中決定方向的序列是
間隔序列
間隔序列
。圖1中一條DNA片段上待敲除基因的兩端存在同向loxP序列，Cre酶能識別并結合到loxP序列的反向重復序列區(qū)，定點切斷間隔序列的
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
，從而實現(xiàn)目標基因的敲除，敲除的基因片段會形成
環(huán)狀
環(huán)狀
（填“線狀”或“環(huán)狀”）結構。若經(jīng)Cre酶作用使得2個loxP位點間的序列發(fā)生反轉，其原因可能是
兩個loxP序列方向相反
兩個loxP序列方向相反
。
（2）Cre/loxP酶系統(tǒng)可以調控基因的表達，在目的基因
上游
上游
（填“上游”或“下游”）插入一個帶有l(wèi)oxP位點的編碼終止密碼子的序列，在Cre酶存在的情況下，目的基因
表達
表達
（填“表達”或“不表達”）。
（3）圖2是利用Cre/loxP酶系統(tǒng)構建融合基因的過程。首先分別擴增Bt基因和Bar基因，以獲得所需要的DNA片段，然后用Cre/loxP酶系統(tǒng)處理連接后的DNA片段，獲得Bt-Bar融合基因片段。PCR1過程中，所用的2種引物的結合位置分別在
啟動子外側和終止子內側（啟動子和終止子的左側）
啟動子外側和終止子內側（啟動子和終止子的左側）
；該過程中，還需添加的物質有
TaqDNA聚合酶、dNTP、（含Mg2+）緩沖液等
TaqDNA聚合酶、dNTP、（含Mg2+）緩沖液等
（至少寫2種）等。有研究表明，大多數(shù)限制酶對裸露的位點不能識別切割，因此必須對識別序列5'末端進行修飾并加上一個至幾個保護堿基，如GGG。由此推測，對Bar基因引物5′端序列的要求是
引物的5'端均要連接上loxP序列，并在末端加上保護堿基序列（GGG）
引物的5'端均要連接上loxP序列，并在末端加上保護堿基序列（GGG）
。

【答案】間隔序列；磷酸二酯鍵；環(huán)狀；兩個loxP序列方向相反；上游；表達；啟動子外側和終止子內側（啟動子和終止子的左側）；TaqDNA聚合酶、dNTP、（含Mg2+）緩沖液等；引物的5'端均要連接上loxP序列，并在末端加上保護堿基序列（GGG）
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/5/11 8:0:9組卷：27引用：2難度：0.5
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  • 1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 2．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    （1）通過上述基因工程技術獲取目標產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)模化生產(chǎn)目標蛋白
    ④目的基因導入受體細胞
    ⑤目的基因和運載體重組構建表達載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復制
    B．規(guī)定擴增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當復制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設計的PCR引物應為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導入受體細胞。載體的化學本質是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5

  • 3．用限制酶EcoRⅤ單獨切割某普通質粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨切割該普通質粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
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