人乳鐵蛋白是一種藥用保健蛋白。如圖表示利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人乳鐵蛋白的過(guò)程,圖中Tetr表示四環(huán)素抗性基因,Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,請(qǐng)回答以下問(wèn)題:
(1)圖中Tetr和Ampr兩基因是質(zhì)粒中的
標(biāo)記基因
標(biāo)記基因
,作用是 便于重組DNA分子的篩選
便于重組DNA分子的篩選
。
(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體,需要將人乳鐵蛋白基因嵌入到 啟動(dòng)子和終止子
啟動(dòng)子和終止子
之間,才能使乳鐵蛋白基因在牛乳腺細(xì)胞中表達(dá)。
(3)五種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如下表所示,要將人乳鐵蛋白基因插入質(zhì)粒,若只允許使用一種限制酶,應(yīng)選擇的限制酶是 Sau3AⅠ
Sau3AⅠ
。
限制酶 |
BamHⅠ |
HaeⅢ |
BclⅠ |
Sau3AⅠ |
NotⅠ |
識(shí)別序列及切割位點(diǎn) |
G↓GATCC CCTAG↑G |
GG↓CC CC↑GG |
T↓GATCA ACTAG↑T |
↓GATC CTAG↑ |
GC↓GGCCGC CGCCGG↑CG |
(4)據(jù)圖分析篩選含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞首先需要在含
氨芐青霉素
氨芐青霉素
(填“四環(huán)素”“氨芐青霉素”或“四環(huán)素或氨芐青霉素”)的培養(yǎng)基上進(jìn)行,原因是
用限制酶切割后破壞了Tetr基因,但不會(huì)破壞Ampr基因,導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞(對(duì)氨芐青霉素具有抗性),能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來(lái)
用限制酶切割后破壞了Tetr基因,但不會(huì)破壞Ampr基因,導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞(對(duì)氨芐青霉素具有抗性),能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來(lái)
。篩選出的重組質(zhì)粒導(dǎo)入牛受精卵,①過(guò)程常用的方法是
顯微注射法
顯微注射法
。
(5)培養(yǎng)出早期胚胎后,科學(xué)家欲進(jìn)行胚胎分割移植,則應(yīng)該選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的
桑葚胚或囊胚
桑葚胚或囊胚
,將其移入盛有操作液的培養(yǎng)皿中,然后用分割針進(jìn)行分割。檢測(cè)轉(zhuǎn)基因牛乳汁中是否含有人乳鐵蛋白,可采用
抗原抗體雜交
抗原抗體雜交
技術(shù)。