1.人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory syncytial virus,HRSV)是一種單鏈RNA病毒,如圖1是構(gòu)建人呼吸道合胞病毒基因組載體的示意圖,相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點為:BclⅠ(T↓GATCA)、EcoRⅠ(G↓AATTC)、XbaⅠ(T↓CTAGA)、Sau3AⅠ(↓GATC)、BamHⅠ(G↓GATCC),請據(jù)圖回答:
?
(1)HRSV的基因組為-RNA,入侵細胞后在
的催化下合成+RNA。被HRSV侵染的人體組織中易觀察到“多核細胞”的現(xiàn)象,請解釋此現(xiàn)象的可能成因
。此現(xiàn)象被科學家發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用于
(技術(shù))。
(2)在RT-PCR中添加的某逆轉(zhuǎn)錄酶能實現(xiàn)從單鏈RNA到雙鏈cDNA的合成過程,試推測該逆轉(zhuǎn)錄酶具有
(①依賴于RNA的DNA聚合酶活性②RNaseH(RNA酶)活性③依賴于DNA的DNA聚合酶活性)等多種活性。HIV的逆轉(zhuǎn)錄酶還有DNA內(nèi)切酶活性,試推測這可能與HIV侵染后
(生理過程)有關(guān)。
(3)過程③需要用
兩種酶切割質(zhì)粒A。過程②設(shè)計引物時在兩種引物的5'端分別添加
兩種酶的識別序列,酶切位點一般不能添加在引物的3'端的主要原因是
。
(4)為制備減毒突變株,科研人員將單個突變堿基引入HRSV基因組cDNA質(zhì)??寺≈校鞒倘鐖D2。已知在細菌體內(nèi)合成的DNA分子有甲基化修飾,通過PCR擴增的DNA鏈無甲基化修飾。
①DpnI識別甲基化的GATC四個堿基序列,因此其能將圖中的
鏈水解消化掉,以留下帶突變堿基DNA鏈,其上缺刻(縫隙)在大腸桿菌細胞內(nèi)完成的修復需要
酶。
②若已知質(zhì)粒B為a個,經(jīng)過程①擴增15個循環(huán),需要突變引物
個,將過程②形成的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入大腸桿菌后復制n輪,得到雙鏈突變的DNA
個。