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重疊延伸PCR技術(shù)是采用具有互補(bǔ)末端的引物,使PCR產(chǎn)物形成了重疊鏈,從而在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過(guò)重疊鏈的延伸,將不同來(lái)源的擴(kuò)增片段重疊拼接起來(lái)的技術(shù),可通過(guò)定點(diǎn)誘變?cè)隗w外改造DNA分子,并將改造后的目的基因?qū)胭|(zhì)粒構(gòu)建目的基因表達(dá)載體。
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(1)如圖所示的重疊延伸PCR技術(shù)中,PCR1的引物是
引物A、引物C
引物A、引物C
。PCR4可獲得大量定點(diǎn)誘變目的基因,此時(shí)的引物為
引物C、引物D
引物C、引物D
。PCR3時(shí)模板DNA不能選擇DNA分子③的原因是
子鏈的延伸方向只能從5’→3',以DNA分子③作模板時(shí)子鏈不能延伸
子鏈的延伸方向只能從5’→3',以DNA分子③作模板時(shí)子鏈不能延伸

(2)為使重疊延伸PCR技術(shù)改造后的目的基因(該基因序列不含圖中限制酶的識(shí)別序列)能與載體正確連接,PCR4時(shí),應(yīng)在基因上、下游引物的
5′
5′
端分別添加限制酶
KpnⅠ、EcoRⅠ
KpnⅠ、EcoRⅠ
的酶切位點(diǎn)。
(3)將目的基因、質(zhì)粒及大腸桿菌混合,溫育一段時(shí)間后涂在含四環(huán)素的平板上培養(yǎng),一段時(shí)間后平板上長(zhǎng)出菌落。這些菌落的菌體內(nèi)
不一定
不一定
(填“一定”、“不一定”)含有目的基因,理由是
含有空白質(zhì)粒的大腸桿菌也能在該培養(yǎng)上生長(zhǎng)
含有空白質(zhì)粒的大腸桿菌也能在該培養(yǎng)上生長(zhǎng)

【答案】引物A、引物C;引物C、引物D;子鏈的延伸方向只能從5’→3',以DNA分子③作模板時(shí)子鏈不能延伸;5′;KpnⅠ、EcoRⅠ;不一定;含有空白質(zhì)粒的大腸桿菌也能在該培養(yǎng)上生長(zhǎng)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:44引用:2難度:0.7
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  • 1.以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù),其中說(shuō)法正確的是(  )

    發(fā)布:2024/12/15 16:30:6組卷:5引用:1難度:0.5
  • 2.科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因(SLA-2基因),構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體,進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1,SLA-2基因長(zhǎng)度為1100bp,質(zhì)粒B的總長(zhǎng)度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)回答:
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    限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ
    識(shí)別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC
    (1)過(guò)程①中,PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是
     
    ,下列4種引物中應(yīng)選擇的是
     
    。
    a  5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
    b  5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
    c  5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
    d  5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
    (2)過(guò)程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是
     
    ,該過(guò)程需要用
     
    處理大腸桿菌,使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有
     
    (抗生素)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
    (3)若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳,請(qǐng)?jiān)诖痤}紙相應(yīng)位置畫(huà)出可能得到的電泳條帶。
    (4)科研中常用呤霉素對(duì)真核細(xì)胞進(jìn)行篩選,一般選擇最低致死濃度的前一個(gè)濃度作為篩選濃度的原因是:既可以讓大部分沒(méi)有抗性的細(xì)胞死亡又不會(huì)讓
     
    。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2,根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為
     
    。
    (5)過(guò)程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測(cè)腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽,其原理是
     
    ,單克隆抗體能檢測(cè)其是否具有正確的
     
    ,從而是否具有生物活性。
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    發(fā)布:2024/12/15 6:30:1組卷:41引用:3難度:0.6
  • 3.下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實(shí)驗(yàn),說(shuō)法錯(cuò)誤的是(  )

    發(fā)布:2024/12/15 6:30:1組卷:3引用:1難度:0.6
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