PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫，是一項在體外提供參與DNA復(fù)制的組分與反應(yīng)條件，對目的基因的核苷酸序列進行大量復(fù)制的技術(shù)。如圖為PCR獲取并擴增目的基因的示意圖，引物的3端有結(jié)合模板DNA的關(guān)鍵堿基，5′端堿基無嚴(yán)格限制。據(jù)圖回答下列問題：
（1）PCR的原理是 DNA半保留復(fù)制DNA半保留復(fù)制，PCR過程中所用的酶是 耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）。
（2）PCR的每次循環(huán)一般包括 變性、復(fù)性、延伸變性、復(fù)性、延伸三步，在PCR過程中，新合成的DNA子鏈的延伸方向是 5’→3’5’→3’，PCR獲取目的基因時；在第 33次循環(huán)后反應(yīng)體系中可出現(xiàn)目的基因。
（3）PCR獲取目的基因時，引物的作用是 界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸。為了方便目的基因與質(zhì)粒的連接，可在引物的5’5’端添加限制酶識別序列。若引物上的限制酶識別序列為CCC↓GGG，在用一種酶連接目的基因與質(zhì)粒時，所用的酶為 T4DNA連接酶T4DNA連接酶。
（4）科學(xué)設(shè)計引物是PCR能否成功的關(guān)鍵。若引物的堿基過多或引物的G、C含量過高，會造成PCR的效率偏低，收獲的目的基因較少，原因是 引物與模板鏈結(jié)合過于緊密，變性時引物不易與模板鏈脫離（影響變性）引物與模板鏈結(jié)合過于緊密，變性時引物不易與模板鏈脫離（影響變性）。若對PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有兩個或多個條帶，從引物角度分析，原因可能是 引物過短導(dǎo)致引物的特異性下降引物過短導(dǎo)致引物的特異性下降。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】DNA半保留復(fù)制；耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）；變性、復(fù)性、延伸；5’→3’；3；界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸；5’；T4DNA連接酶；引物與模板鏈結(jié)合過于緊密，變性時引物不易與模板鏈脫離（影響變性）；引物過短導(dǎo)致引物的特異性下降
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：6引用：1難度：0.6
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．科學(xué)家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點突變技術(shù)屬于（填“基因工程”或“蛋白質(zhì)工程”）?？衫枚c突變的DNA構(gòu)建基因表達載體，常用將基因表達載體導(dǎo)入植物細(xì)胞，還需用到植物細(xì)胞工程中的技術(shù)，才能最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。
（2）PCR過程所依據(jù)的原理是。利用PCR技術(shù)擴增，若將一個目的基因復(fù)制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程稱為?？蒲腥藛T通過實驗研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉(zhuǎn)基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長激素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞核中，經(jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞是因為這種細(xì)胞的全能性最容易表達
B．采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測外源基因在小鼠細(xì)胞內(nèi)是否成功表達
C．人的生長激素基因能在小鼠細(xì)胞表達，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞進行核移植（克隆），可以獲得多個具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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